牦牛前体脂肪细胞的分离培养及成脂诱导分化

摘要

本文旨在建立牦牛前体脂肪细胞的体外分离及原代培养体系，为牦牛脂肪细胞的相关研究提供试验材料和原代细胞培养模型。以高原型牦牛皮下脂肪组织为材料，通过酶消化法和组织块培养法分离前体脂肪细胞，再使用分化培养基诱导其分化为成熟的脂肪细胞，并采用CCK-8检测细胞增殖期间的生长曲线，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测DLK-1和PPAR-γ的表达量。结果表明：酶消化法获得的牦牛前体脂肪细胞在24 h后开始贴壁，贴壁细胞形态多样；组织块培养法在第4天才呈现出游离的前体脂肪细胞，且其生长速度较缓慢。前体脂肪细胞的生长曲线整体呈现“S”形。前体脂肪细胞诱导分化后，细胞内部积累大量脂滴，并逐渐分化为成熟的脂肪细胞；相较于原代脂肪细胞，传代后的脂肪细胞生长速度较快。qRT-PCR检测发现，脂肪细胞分化后，DLK-1的表达量显著降低，PPAR-γ的表达量显著升高。综上，无论采用酶消化法还是组织块培养法，均能成功获得牦牛前体脂肪细胞，并可通过诱导使其分化为成熟的脂肪细胞。

关键词

牦牛 / 前体脂肪细胞 / 细胞培养 / 诱导分化