传染性造血器官坏死病毒G蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

马淑兄; 李长忠; 王璐; 贾春艳; 陈艳霞; 马成林; 金文杰

doi:10.13901/j.cnki.qhwxxbzk.2025.04.008

青海大学学报 ›› 2025, Vol. 43 ›› Issue (04) : 52 -58+64. DOI: 10.13901/j.cnki.qhwxxbzk.2025.04.008

传染性造血器官坏死病毒G蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

马淑兄, 李长忠, 王璐, 贾春艳, 陈艳霞, 马成林, 金文杰

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摘要

针对由传染性造血器官坏死病毒(infectious hematopoietic necrosis virus, IHNV)引发的鱼类重大传染病，通过原核表达系统制备IHNV关键抗原G蛋白，可开发其特异性多克隆抗体。本文利用基因工程技术构建了重组质粒pET-28a-G,转化至大肠杆菌Top10感受态细胞，经IPTG诱导后获得IHNV G蛋白；再对该蛋白用盐酸胍复性后采用镍柱亲和层析法进行纯化，纯化的蛋白与弗氏佐剂混合免疫小鼠；最后采用间接ELISA法检测抗体效价及Western blot验证抗体特异性。结果表明：通过基因工程可成功构建pET-28a-G原核表达质粒，获得的IHNV G蛋白在大肠杆菌中能成功表达，大小52.51 kDa;纯化的IHNV G蛋白与弗氏佐剂混合免疫小鼠4次后，可制备出多克隆抗体，抗体效价达到1∶128 000,且能特异性识别IHNV G重组蛋白。研究结果表明，原核表达的IHNV G重组蛋白具有较强的免疫原性，可诱导小鼠产生较高效价的抗体，制备的多克隆抗体具有良好的反应性和特异性，为后续胶体金检测方法的开发、G单克隆抗体制备、疫苗研制等奠定基础。