绵羊Nectin4的原核表达及多克隆抗体的制备

摘要

为制备绵羊Nectin4分子的多克隆抗体，本研究采用PCR技术将绵羊Nectin4基因克隆至pET-28a原核表达载体，随后转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞进行诱导表达，产物纯化后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，通过间接ELISA法测定多克隆抗体效价，并用Western blot和IFA方法对多克隆抗体反应性进行进一步鉴定。结果表明：绵羊Nectin4基因全长1 607 bp,最佳诱导表达条件为温度30℃,IPTG浓度0.4 mmol/L,诱导时间14 h,表达的绵羊Nectin4蛋白分子量大小约59.3 kDa,制备的多克隆抗体效价为1∶64 000,Western blot和IFA结果显示，制备的多克隆抗体均可特异性识别绵羊Nectin4蛋白。本研究成功表达并纯化了绵羊Nectin4蛋白，且制备的多克隆抗体可特异性识别并结合绵羊Nectin4分子，可为后续深入探究PPRV致病机理提供材料基础。

关键词

小反刍兽疫 / 脊髓灰质炎病毒受体相关分子4(Nectin4) / 原核表达 / 多克隆抗体