一种基于real-time PCR技术的TTV检测方法的建立及应用

摘要

目的：本研究旨在开发一种具有更高灵敏度和特异性的TTV检测技术，为揭示TTV在多种疾病过程中的作用提供重要的技术支持。方法：为了更精确、灵敏的检测TTV，本研究分析了目前公布的所有亚型的TTV基因序列，在此基础上建立了一种基于UTR区域的real-time PCR检测方法，并与文献报道应用较为广泛的PCR检测方法进行了对比。结果：本研究建立的方法在1×107～1×101 copies/μL标准品浓度范围内具有良好的线性关系，相关系数为1.000，斜率为-3.446，检测下限为1×101 copies/μL。重复性试验结果显示，组内变异系数为7.22%，表明本方法重复性、稳定性较强。针对30份临床样本，使用本研究建立的real-time PCR检测方法及目前被多个研究所使用的4套引物进行对比。结果表明，本研究所建立的方法灵敏度显著高于文献中报道的4种方法（P<0.01）;Sanger测序结果表明，本方法检测出的30份阳性样本均为TTV，检测特异性为100%。结论：本研究采用基于TaqMan探针的real-time PCR检测方法，检测灵敏性高、覆盖基因型范围广，尤其对于TTV病毒载量较低的情况下能够进行定量检测，对于TTV病毒的致病性及作为免疫标志物的应用提供重要的技术支持。

关键词

Torque teno virus / 基因组扩增测序 / Real-time PCR检测