丹酚酸B通过调控AMPK介导的铁死亡保护缺氧/复氧诱导的肾小管上皮细胞的损伤

摘要

目的：探究丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)对于缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）所致肾小管上皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法：体外实验细胞分组为正常对照（Con）组，Sal B+Con组、H/R组、Sal B+H/R组，以及Con组、H/R组、Sal B+H/R组、H/R+CC(Compound c,AMPK抑制剂)组、H/R+Sal B+CC组两部分。体外实验用CCK-8法检测HK-2细胞活性；细胞震碎，取上清，用酶标仪检测GSH和MDA的含量；Western blot检测p-AMPK、GPX4、ACSL4和FSP1蛋白的表达情况；细胞免疫荧光检测铁死亡指标GPX4、ACSL4蛋白的表达情况；流式细胞术检测线粒体膜电位和细胞凋亡。结果：体外实验结果显示，Sal B在20～160μmol/L对正常HK-2细胞活性无明显毒性（P>0.05）；与模型组相比，20、40、80μmol/L的Sal B呈剂量依赖性提高HK-2细胞的活性（P<0.01）。与模型组相比，H/R+Sal B组细胞MDA含量降低，GSH含量升高，p-AMPK、GPX4和FSP1蛋白的表达水平升高，ACSL4蛋白的表达降低，细胞线粒体膜电位显著升高，细胞凋亡率显著下降（P<0.05）;H/R+AMPK组较H/R+Sal B组FSP1和GPX4蛋白表达水平降低，ACSL4蛋白的表达水平升高（P<0.05），细胞线粒体膜电位显著降低（P<0.05），加入Sal B可以逆转这一情况（P<0.05）。结论：Sal B可减轻H/R的肾小管上皮细胞的损伤，其机制可能与激活AMPK通路减轻肾小管上皮细胞铁死亡有关。

关键词

急性肾损伤 / 丹酚酸B / 铁死亡 / AMPK / 缺氧/复氧