大黄灵仙方调控肝内胆管细胞炎症大鼠的作用及机制研究

摘要

目的：观察大黄灵仙方对肝内胆管细胞炎症模型大鼠MAPK/NF-κB信号通路中IKKα、ASK1、MKK3以及CX3CL1关键因子的表达水平的影响，探讨其缓解肝内胆管细胞炎症的改善作用及可能机制。方法：45只SD大鼠按照完全随机方法分为9组，每组大鼠5只，空白组、模型组、大黄灵仙颗粒组、NF-κB组、p38MAPK组、NF-κB+p38MAPK组、NF-κB+大黄灵仙颗粒组、p38MAPK+大黄灵仙颗粒组、NF-κB+p38MAPK+大黄灵仙颗粒组。除空白组外，余下各组大鼠均在胆总管注射5 mg/kg LPS制备肝内胆管炎症模型。第7天灌胃结束后取大鼠胆管树，采用HE染色观察其炎性程度，蛋白免疫印迹法和实时荧光定量PCR检测IKKα、ASK1、MKK3以及CX3CL1蛋白及mRNA表达量。结果：HE病理结果显示，模型组的肝内胆管组织和细胞炎症明显，加入大黄灵仙颗粒和信号阻断剂后肝内胆管炎症状态较前改善，总病理评分差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较，大黄灵仙颗粒组、p38MAPK组、NF-κB组、NF-κB+p38MAPK组、NF-κB+大黄灵仙颗粒组、p38MAPK+大黄灵仙颗粒组、NF-κB+p38MAPK+大黄灵仙颗粒组的ASK1、CX3CL1蛋白及mRNA表达量下降，MKK3 mRNA表达量上升以及p38MAPK组IKKα和NF-κB+大黄灵仙颗粒组MKK3蛋白表达量上升（P<0.05）。与大黄灵仙颗粒组比较，p38MAPK组、NF-κB组、NF-κB+p38MAPK组、p38MAPK+大黄灵仙颗粒组、NF-κB+大黄灵仙颗粒组、NF-κB+p38MAPK+大黄灵仙颗粒组的ASK1、CX3CL1mRNA表达量下降，p38MAPK+大黄灵仙颗粒组、NF-κB+大黄灵仙颗粒组、NF-κB+p38MAPK+大黄灵仙颗粒组的MKK3 mRNA表达量上升（P<0.05）。与大黄灵仙颗粒组相比，p38MAPK组的IKKα蛋白表达量下降，NF-κB+大黄灵仙颗粒组的ASK1、MKK3蛋白表达量上升（P<0.05），而NF-κB+p38MAPK+大黄灵仙颗粒组的CX3CL1蛋白表达量下降（P>0.05）。结论：大黄灵仙方可缓解LPS诱导的大鼠肝内胆管炎症反应，促进胆管细胞的修复，从而达到降低PIS发生及术后复发的目的，其作用机制可能与抑制NF-κB/MAPK信号通路中的IKKα、ASK1、MKK3以及CX3CL1关键炎症因子的活化有关。

关键词

大黄灵仙方 / 胆管炎症 / IKKα / ASK1 / MKK3 / CX3CL1