肝宁方对肝细胞癌的影响及作用机制初探

摘要

目的：研究肝宁方对肝细胞癌的作用并初步探讨其作用机制。方法：细胞实验：将40只SD大鼠予肝宁方灌胃7 d后提取含药血清。采用CCK8检测肝宁方含药血清浓度分别为5%、10%、20%、30%时对人肝癌细胞HepG2活力的影响。将HepG2细胞分为空白组和肝宁方组含药血清组，使用5%肝宁方含药血清干预24 h后提取蛋白进行质谱前处理，再进行DIA定量蛋白质组学分析，包括建立图谱数据库和DIA数据采集及分析，最后采用蛋白免疫印迹（WB）技术验证TAGLN蛋白表达水平。动物实验：10只BALB/c裸小鼠分为模型组和肝宁方组，予皮下注射人肝癌细胞MHCC-97H构建肝癌异种植瘤模型，造模成功后给予0.9%生理盐水或肝宁方灌胃，连续给药14 d。造模开始到给药结束，每隔1周测量皮下肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线，给药结束后剥离肿瘤，采用苏木精-伊红（HE）染色法检测肿瘤组织病理学情况。结果：细胞实验：肝宁方含药血清呈剂量依赖性降低HepG2细胞活力（P<0.05,P<0.01），选用5%肝宁方含药血清进行后续实验。DIA定量蛋白质组学分析结果发现36个上调蛋白，23个下调蛋白（P<0.05）,GO富集分析显示细胞组分、细胞功能及生物学过程等。KEGG富集分析表明差异蛋白与补体和凝血级联反应、PPAR信号通路等关系密切。Reactome富集分析显示了包括血小板α颗粒含量的胞吐作用在内的20条信号通路。PPI网络分析发现TGFB1、SERPINE1、TAGLN等38种蛋白位于网络节点。WB结果发现肝宁方含药血清组TAGLN蛋白表达比空白组明显上调（P<0.01）。动物实验：通过肝癌裸鼠皮下肿瘤模型发现肝宁方能够抑制肿瘤生长（P<0.05）,HE染色结果提示肝宁方可促进肿瘤坏死。结论：肝宁方能抑制HepG2细胞增殖及HCC肿瘤增长，促进肿瘤组织坏死，其作用机制涉及多个生物进程和信号通路，其中可能与调控TAGLN蛋白表达有关。

关键词

肝宁方 / 肝癌 / 蛋白质组学 / TAGLN蛋白表达