PCSK9通过溶酶体稳态-自噬途径调控心肌缺氧再复氧损伤

许卫攀, 徐航, 刘滴, 钟可文, 李柳青, 王琪

doi:10.13210/j.cnki.jhmu.20240612.001

海南医学院学报 ›› 2024, Vol. 30 ›› Issue (21) : 1601 -1606. DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20240612.001

PCSK9通过溶酶体稳态-自噬途径调控心肌缺氧再复氧损伤

许卫攀, 徐航, 刘滴, 钟可文, 李柳青, 王琪

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摘要

目的：研究前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)在心肌缺氧再复氧（hypoxia-reoxygenation,H/R）损伤中的作用及机制。方法：C57BL/6乳鼠原代心肌细胞，随机分为4组：空白对照组（Control组）、缺氧/复氧组（H/R组）、阴性腺相关病毒组（H/R+Scramble组）、AAV9-shPCSK9重组腺相关病毒组（H/R+shPCSK9组）。建立H/R模型（缺氧2 h，复氧4 h），使用CCK-8检测各组细胞活力的变化，LDH试剂盒检测细胞损伤程度，白光显微镜观察心肌细胞形态变化，共聚焦显微镜观察细胞内染色质凝集、自噬小体、溶酶体数量和形态等超微结构变化，western blot检测PCSK9、LC3Ⅱ、P62、LAMP2、Cathepsin B等蛋白表达变化。结果：H/R组和H/R+Scramble组较Control组的心肌细胞活力明显降低，LDH水平显著升高，PCSK9、LC3Ⅱ、P62、Cathepsin B蛋白显著升高，而LAMP2蛋白明显降低（P<0.05），这些变化在H/R+shPCSK9组则被逆转。此外，与H/R+Scramble组相比，白光显微镜下H/R+shPCKS9组的部分心肌细胞形态明显较为正常，部分细胞亦有缩短、肿胀以及成团状，但心肌细胞数量仍较多，同时共聚焦显微镜下H/R+shPCKS9组溶酶体数量及比例明显升高，而自噬小体数量虽增加但所占比例显著降低。结论：PCSK9通过破坏溶酶体稳态引起自噬通路受阻，导致自噬小体聚集以及自噬性死亡，进而加剧了心肌缺氧再复氧损伤，而下调PCSK9可通过维持溶酶体稳态，促进自噬通量，从而减轻H/R所导致的心肌细胞损伤。