miR-21-5p靶向调控Skp2促进骨关节炎软骨细胞凋亡并抑制自噬

摘要

目的：从人软骨细胞角度探讨miR-21-5p靶向调控Skp2对OA软骨细胞凋亡、自噬的影响。方法：TargetScan在线网站预测miR-21-5p与Skp2结合位点，双荧光素酶实验验证miR-21-5p与Skp2的直接作用，选择原代人软骨细胞分离与培养，采用CCK-8实验检测细胞增殖能力，qPCR检测miR-21-5p对人软骨细胞中Skp2、Bax、Bcl-2、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin1、CARM1mRNA表达量，Westernblot检测Skp2、CARM1、Bax、Bcl-2、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1蛋白表达水平，后期构建Skp2过表达载体进一步检测相关蛋白表达情况。结果：TargetScan在线网站预测在Skp2 mRNA的3’UTR中有潜在miR-21-5p结合序列；双荧光素酶方法验证miR-21-5p与Skp2存在互作关系；qPCR检测出Skp2过表达验证成功，证实在软骨细胞中Skp2呈低表达；Western blot检测显示miR-21-5p可通过调节Skp2、CARM1、Bax、Bcl-2、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1水平，促进细胞凋亡，减少人软骨细胞自噬。结论：miR-21-5p可负向调控Skp2，促进OA软骨细胞凋亡并抑制自噬。

关键词

骨关节炎 / 软骨细胞 / miR-21-5p / Skp2 / 凋亡 / 自噬