化瘀祛湿方对miR-21靶向Skp2介导早期膝骨关节炎软骨细胞自噬的影响

摘要

目的：研究miR-21-5p介导Skp2对膝OA软骨细胞自噬影响，探讨化瘀祛湿方对膝OA软骨细胞的保护作用。方法：（1）取全膝关节置换术的人体膝OA软骨组织，采用FISH单染试验检测miR-21-5p表达和定位，免疫荧光检测Skp2表达，TUNEL染色试验检测膝OA细胞凋亡，Western blot法检测Bax、Bcl-2、Beclin1、CARM1、LC3Ⅱ/Ⅰ和Skp2相对表达量；（2）取SD大鼠36只，按随机数字法分为正常对照组、假手术组、模型组、模型+空载组、模型+miR-21-5p干扰组、模型+化瘀祛湿方组6组，每组6只；采用石蜡切片阿利新蓝染色观察软骨形态结构，qPCR、Western blot法检测各组软骨组织Beclin1、CARM1、LC3Ⅱ/Ⅰ、Skp2相对表达量，免疫组化检测Skp2的IOD/Area值。结果：FISH检测显示miR-21-5p在人体膝OA软骨组织中高表达，免疫荧光检测表明Skp2在人体膝OA软骨组织中低表达；TUNEL检测发现，人体膝OA软骨组织凋亡显著增加；Western blot法检测显示，与正常对照组相比，人体膝OA软骨组织中Bax、CARM1相对表达量较正常组显著升高，而Bcl-2、LC3Ⅱ/Ⅰ、Skp2相对表达量明显降低，Beclin1相对表达量稍降低（P<0.05）。动物实验显示，采用miR-21-5p干扰处理后，Beclin1、CARM1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著下降，Skp2稍降低；免疫组化检测发现Skp2 IOD/Area值与正常对照组相比，模型组IOD/Area值显著降低（P<0.05）；与模型组相比，模型+化瘀祛湿方组IOD/Area值显著升高（P<0.05）；石蜡切片阿利新蓝染色显示与假手术照组相比，模型+空载组、模型+miR-21-5p干扰组蓝色变浅，但模型组蓝色变深，模型+化瘀祛湿组蓝色较为明显。结论：miR-21-5p可负向调控Skp2，介导膝OA软骨细胞自噬，加速OA发展；化瘀祛湿方可能通过抑制miR-21-5p，提高Skp2表达，起到延缓膝OA退变的作用。

关键词

骨关节炎 / miR-21 / 泛素连接酶S期激酶相关蛋白2 / 化瘀祛湿方 / 自噬