溃疡病诱导的猕猴桃酵母双杂交文库构建及泛素连接酶PUB23互作蛋白筛选

王涛, 宁传丽, 宣继萍

doi:10.13938/j.issn.1007-1431.20240239

中国南方果树 ›› 2025, Vol. 54 ›› Issue (05) : 135 -139. DOI: 10.13938/j.issn.1007-1431.20240239

溃疡病诱导的猕猴桃酵母双杂交文库构建及泛素连接酶PUB23互作蛋白筛选

王涛, 宁传丽, 宣继萍

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摘要

由丁香假单胞菌猕猴桃致病变种引起的猕猴桃细菌性溃疡病，是目前猕猴桃生产上危害最严重的病害之一。以泛素连接酶PUB23为诱饵，通过酵母双杂交技术筛选PUB23潜在的互作蛋白，可为探索PUB23在猕猴桃溃疡病免疫反应中的作用提供基础。以中华猕猴桃两个抗性不同的品种红阳（感病）和金魁（抗病）为材料构建猕猴桃感染溃疡病的酵母双杂交文库，以PUB23为诱饵筛选获得PUB23的潜在互作蛋白，对阳性克隆进行PCR扩增和测序分析，并进行回转验证。结果表明，构建的溃疡病诱导的猕猴桃双杂交文库良好，插入片段长度集中在250～2 500 bp,文库滴度为5×10～6 CFU·mL^-1。获得生长良好且显蓝色的克隆6个，序列比对结果表明这6个克隆的预测产物参与植物代谢、生长调节和抗病过程。其中一个克隆对应的三螺旋转录因子已被发现参与植物的抗病免疫反应。研究成功构建了溃疡病诱导的猕猴桃酵母双杂交文库并筛选获得PUB23的潜在互作蛋白，为探索PUB23在猕猴桃溃疡病免疫反应中的作用奠定了基础。