沙糖橘几丁质酶基因orange1.1t05124的克隆及原核表达

胡亚平; 陈聪; 吉前华; 郭雁君; 郭丽英; 蒋惠; 杨凤梅

doi:10.13938/j.issn.1007-1431.20240426

中国南方果树 ›› 2025, Vol. 54 ›› Issue (01) : 9 -15. DOI: 10.13938/j.issn.1007-1431.20240426

沙糖橘几丁质酶基因orange1.1t05124的克隆及原核表达

胡亚平, 陈聪, 吉前华, 郭雁君, 郭丽英, 蒋惠, 杨凤梅

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摘要

柑橘几丁质酶作为一种重要的抗真菌蛋白，可以降解真菌细胞壁中的几丁质。利用沙糖橘的cDNA文库克隆了沙糖橘几丁质酶基因orange1.1t05124。该基因位于第8染色体末端，包含3个外显子。将该基因克隆到pEASY-Blunt E1载体中，测序验证序列无误，随后转入大肠杆菌BL21(DE3)中，经异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导生成了目的蛋白，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE电泳)验证成功表达，在产物的包涵体中纯化到了目标蛋白。通过生物信息学分析发现，该蛋白具有信号肽，定位在细胞外，是单体的球状蛋白质。通过进化树分析发现，该几丁质酶在植物中广泛存在同源蛋白质，且都含有GH19几丁质酶催化结构域。对柑橘几丁质酶基因进行克隆和表达，可为了解该基因家族的抗病机理和开发基于几丁质酶的新型生物农药、生物肥料提供基因资源。