中华猕猴桃“红阳”茎尖小滴玻璃化法超低温保存技术优化

张茜; 王凤琪; 刘鑫; 樊高敏; 李明章; 王丽华

doi:10.13938/j.issn.1007-1431.20250226

中国南方果树 ›› 2026, Vol. 55 ›› Issue (02) : 154 -159. DOI: 10.13938/j.issn.1007-1431.20250226

中华猕猴桃“红阳”茎尖小滴玻璃化法超低温保存技术优化

张茜, 王凤琪, 刘鑫, 樊高敏, 李明章, 王丽华

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摘要

为建立中华猕猴桃小滴玻璃化法茎尖超低温保存技术体系，为猕猴桃种质资源长期保存提供新途径，基于小滴玻璃化超低温保存法，以红肉中华猕猴桃“红阳”为材料，通过单因子和双因子试验研究预处理培养基、预处理时间和脱水冷冻时间对猕猴桃茎尖超低温保存效果的影响，并通过染色体倍性检测保存后的再生苗的遗传稳定性。结果表明，优化后的中华猕猴桃茎尖小滴玻璃化法超低温保存技术流程：切取“红阳”猕猴桃组培苗的顶芽茎尖（1.5～2.0mm）；预培养基（MS+0.5mol/L蔗糖）中振荡（100rpm/min）预培养1d；在加载液（MS+0.4mol/L蔗糖+2mol/L甘油）中加载20min(0℃冰上)；在PVS2玻璃化液（MS+15%乙二醇+15%DMSO+0.4mol/L蔗糖）中脱水处理40min(0℃冰上)；将脱水处理后的茎尖置于铝箔条上的PVS2小液滴中，快速浸入液氮中保持至少1min，再转入液氮储存罐中进行保存；卸载液（MS+1.2mol/L蔗糖）中解冻处理20min(35℃水浴)；茎尖转入再生培养基（MS+1.0mg/L ZT+0.1mg/L NAA+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂）中暗培养；1周后转入新鲜培养基中，在正常光照下恢复培养。茎尖经该方法液氮冻存1个月后的成活率和再生率分别为55%和50%。倍性检测结果表明，再生植株无染色体倍性变异，遗传稳定。本试验建立的中华猕猴桃茎尖小滴玻璃化法超低温保存技术简便高效，为中华猕猴桃种质资源冷冻保存库的建立提供了技术依据。