扁桃晚丰PdAOC基因的克隆与表达分析

李鑫鑫; 塔吉古丽·阿力木; 唐静; 暑合妮克·努尔兰江; 王佳; 余镇藩

doi:10.20088/j.cnki.jxau.2026.01.008

新疆农业大学学报 ›› 2026, Vol. 49 ›› Issue (1) : 56 -63. DOI: 10.20088/j.cnki.jxau.2026.01.008

扁桃晚丰PdAOC基因的克隆与表达分析

李鑫鑫, 塔吉古丽·阿力木, 唐静, 暑合妮克·努尔兰江, 王佳, 余镇藩

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摘要

明确PdAOC基因在扁桃(Prunus dulcis L.)晚丰响应-5～-30℃梯度低温胁迫中的表达特征,探究该基因与扁桃低温胁迫响应的关联性,为扁桃抗寒基因挖掘及分子育种提供试验依据,以扁桃晚丰叶片及1年生枝条为材料,通过PCR技术克隆PdAOC基因,构建原核表达载体实现目标蛋白的诱导表达与纯化,利用qRT-PCR技术测定梯度低温胁迫下该基因在1年生枝条中的相对表达量,分析其低温响应表达模式;结合亚细胞定位明确PdAOC蛋白的细胞定位特征。原核表达中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导可表达分子量约28.87 kD的重组蛋白,经亲和层析可获得高纯度目标蛋白,验证了该蛋白的体外可表达性。随着温度的降低,扁桃晚丰1年生枝条相对基因表达量呈先升高后下降趋势,在-15℃时达到表达峰值,且试验低温范围内表达量均高于基础水平。PdAOC基因在扁桃晚丰中具有典型的AOC家族基因序列特征,可在原核系统中高效表达,其编码蛋白定位于细胞膜,该基因的表达受低温胁迫诱导且与胁迫程度密切相关,正向参与扁桃晚丰的低温胁迫响应过程,是扁桃抗寒相关研究中具有重要研究价值的基因。综上,PdAOC基因是扁桃晚丰响应低温胁迫的关键功能基因,可作为扁桃抗寒分子育种与抗寒机制研究的重要候选基因。