球孢白僵菌XJBB-01株Pr1丝氨酸蛋白酶高效表达菌株的构建及其对拉合尔钝缘蜱毒力测定

摘要

本研究利用根癌农杆菌介导法、潮霉素抗性筛选将Pr1丝氨酸蛋白酶CDEP2基因转入球孢白僵菌XJBB-01株，经酶活性测定获得球孢白僵菌（Beauveria bassiana）Pr1丝氨酸蛋白酶高效表达菌株；测定了转化前后菌株Pr1丝氨酸蛋白酶活性和孢子悬液浓度为1×10～7 CFU/mL时对拉合尔钝缘蜱（Ornithodoros lahorensis）不同生长时期的毒力。结果表明，经潮霉素抗性筛选、PCR鉴定成功获得球孢白僵菌工程菌株Pr1-1、Pr1-2;对2株工程菌株的表型进行分析，与XJBB-01株相比，Pr1-1、Pr1-2的菌落生长速度及产孢量均显著提高（P<0.05）。其中，Pr1-1、Pr1-2的菌落生长速度分别为9.27、8.87 mm/d,较XJBB-01株分别提高了0.77、1.17 mm/d;产孢量分别为4.58×10～6、5.22×10～6个/cm²,较XJBB-01株分别提高了0.51×10～6、1.15×10～6个/cm²。测定了XJBB-01株和Pr1-1、Pr1-2株的酶活性，其Pr1-1、Pr1-2酶活性分别为34.13、35.58 U/mL,相比XJBB-01株酶活性分别显著提高了5.46、6.91 U/mL（P<0.05）。在25℃,孢子悬液浓度为1×10～7 CFU/mL时，与XJBB-01株相比，Pr1-1、Pr1-2株对拉合尔钝缘蜱卵的孵化率分别降低了23.3%、26.6%,幼蜱致死率分别提高17.4%、20.7%,成蜱致死率分别提高16.7%、23.3%,幼蜱的半数致死时间分别加快了2.3、2.5 d,成蜱的LT₅₀分别加快了2.6、3.3 d,差异显著（P<0.05）。

关键词

球孢白僵菌 / Pr1丝氨酸蛋白酶 / 遗传转化 / 拉合尔钝缘蜱 / 毒力测定

基金资助

国家自然科学基金项目(32060803); 新疆维吾尔自治区天山英才创新团队项目(2023TSYCTD0008); 新疆维吾尔自治区兽医学特色学科和新疆草食动物新药研究与创制重点实验室开放课题(XJCDVM-HDRC-S202412); 新疆农业大学大学生创新项目(dxscx2025113)