PLEKHG5基因敲低对马疱疹病毒1型复制的影响

摘要

为探讨PLEKHG5在马疱疹病毒1型（Equine herpesvirus type 1,EHV-1）感染BHK-21细胞中的作用,设计并合成针对PLEKHG5基因的特异性sgRNA，将其克隆至lentiCRISPR v2载体并包装成重组慢病毒，用于感染BHK-21细胞，经嘌呤霉素筛选获得PLEKHG5敲低细胞群（PLEKHG5 KD）。采用Western blot技术验证敲低效率；通过CCK-8法检测PLEKHG5敲低对BHK-21细胞活性的影响。进一步以EHV-1感染上述细胞模型，分别采用实时荧光定量PCR、Reed-Muench法及Western blot检测病毒载量、病毒滴度及相关病毒蛋白的表达水平。Western blot结果显示，与对照组细胞相比，PLEKHG5基因敲低细胞模型中PLEKHG5蛋白表达水平降低（P<0.01）;CCK-8试验结果显示，PLEKHG5基因敲低的BHK-21细胞在增殖能力与对照组相比未出现明显变化。EHV-1感染后，Western blot和qPCR试验均显示，PLEKHG5基因敲低降低EHV-1的复制水平（P<0.01），同时，敲低PLEKHG5可显著减轻EHV-1感染对细胞所造成的病变效应。综上，本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了敲低PLEKHG5基因的BHK-21细胞模型，并提示PLEKHG5在EHV-1复制过程中发挥着重要作用，为PLEKHG5基因的生物学功能及其在EHV-1感染中的作用机制提供了可靠的试验基础。

关键词

CRISPR/Cas9技术 / PLEKHG5基因 / 马疱疹病毒1型(EHV-1) / 病毒复制

基金资助

国家自然科学基金（32460879）; 中央引导地方科技发展项目; 新疆维吾尔自治区天山英才项目（2022TSYCCX0049）; 新疆维吾尔自治区重点实验室项目（XJCDVM-HDRC-S202401、XJCDVM-HDRC-S202410）; 新疆农业大学研究生科研创新项目（XJAUGRI2024006）