小鼠抗西方马脑炎病毒E2蛋白胞外区(E2ecto)单克隆抗体的制备

摘要

目的 制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法 构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后，IPTG诱导表达，主要为包涵体形式。包涵体纯化后，通过变性、复性、超滤等制备得到E2ecto蛋白；以QuickAntibody-Mouse5W为佐剂，将E2ecto蛋白肌肉免疫BALB/c小鼠，间隔21 d加强1次。免疫后35 d,取效价超过1×10～4的小鼠腹腔接种1次E2ecto蛋白，3 d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。通过有限稀释法筛选稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞，接种小鼠腹腔后制备腹水；利用ELISA检测抗体亚型及腹水中抗体效价的水平；将真核表达质粒pCAGGS-WEEV-CE3E2E1转染BHK-21细胞，通过免疫荧光法(IFA)鉴定上述mAb的生物学活性；利用东方马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)的E2ecto蛋白进行ELISA鉴定上述抗体的特异性。结果 成功表达及复性获得了纯化的WEEV E2ecto蛋白；制备了3G6G10、 3D7G2、 3B9E8、 3D5B7四株mAb,其亚型分别为IgG2c(κ)、 IgM(κ)、 IgM(κ)、 IgG1(κ); 3G6G10、 3B9E8、 3D7G2腹水抗体效价均为10～5, 3D5B7达到10～7;该4株抗体与VEEV和EEEV等其他脑炎甲病毒无交叉反应。结论 成功制备了4株特异性结合WEEVE2ecto的小鼠mAb。

关键词

西方马脑炎病毒(WEEV) / E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto) / 原核表达 / 单克隆抗体(mAb)