血红素加氧酶1(HO-1)基因敲除影响小鼠肺脏免疫细胞组成平衡并加重脂多糖诱导的急性肺损伤

摘要

目的 评价血红素加氧酶1（HO-1）基因缺失对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）小鼠肺脏免疫细胞组成及炎症性损伤的影响。方法 选取C57BL/6野生型（WT）小鼠和同背景HO-1条件敲除(HO-1^-/-)小鼠，按照随机数字法分为WT对照组、 LPS处理的WT组、 HO-1^-/-对照组和LPS处理的HO-1^-/-组。LPS处理的WT组和LPS处理的HO-1^-/-组分别经尾静脉注射LPS（15 mg/kg）建立ALI模型，WT对照组和HO-1^-/-对照组经尾静脉注射同等体积生理盐水。造模12 h后，处死小鼠并收集各组肺组织。HE染色观察肺组织病理变化。PCR检测肺组织肿瘤坏死因子α （TNF-α）、白细胞介素1β （IL-1β）和IL-6 mRNA表达。流式细胞术检测肺组织中性粒细胞（CD45⁺CD11b⁺Ly6G⁺Ly6C^-）、总单核细胞(CD45⁺CD11b⁺Ly6C^hi)、促炎性单核细胞亚群(CD45⁺CD11b⁺Ly6C^hiCCR2^hi)、总巨噬细胞（CD45⁺CD11b⁺F4/80⁺）、 M1巨噬细胞亚群（CD45⁺CD11b⁺F4/80⁺CD86⁺）、 M2巨噬细胞亚群（CD45⁺CD11b⁺F4/80⁺CD206⁺）、总T细胞（CD45⁺CD3⁺）、 CD3⁺CD4⁺T细胞亚群、 CD3⁺CD8⁺ T细胞亚群和髓源性抑制细胞（MDSC, CD45⁺CD11b⁺Gr1⁺）百分比。结果 与相应对照组相比，LPS处理的WT和HO-1^-/-小鼠，肺组织炎症损伤加重；TNF-α、 IL-1β和IL-6 mRNA水平增加；中性粒细胞、总单核细胞、促炎性单核细胞亚群、 MDSC和总巨噬细胞比例显著增加；CD3⁺、 CD3⁺CD4⁺和CD3⁺CD8⁺ T细胞比例显著降低。静息状态下，与WT对照组小鼠相比，HO-1^-/-对照组小鼠肺脏中性粒细胞、单核细胞、促炎性单核细胞比例增加；CD3⁺和CD3⁺CD8⁺ T细胞比例降低。与LPS处理的WT小鼠相比，LPS处理的HO-1^-/-小鼠肺组织TNF-α和IL-1β mRNA表达水平更高，总单核细胞、促炎性单核细胞亚群、 M1巨噬细胞和M1/M2比值显著增加；CD3⁺CD8⁺ T细胞百分比显著降低。结论 HO-1的缺失影响ALI小鼠肺脏免疫系统功能，加重LPS刺激后的炎症性损伤。

关键词

血红素加氧酶1 / 急性肺损伤 / 中性粒细胞 / 单核细胞 / 巨噬细胞 / T淋巴细胞