敲低线粒体转录因子A(TFAM)抑制人宫颈癌细胞及骨肉瘤细胞自噬及增殖、侵袭和迁移

摘要

目的 研究线粒体转录因子A（TFAM）对宫颈癌HeLa细胞及骨肉瘤U2OS细胞的线粒体功能、自噬、增殖、侵袭、迁移的影响。方法 HeLa、 U2OS细胞转染TFAM小干扰片段（si-TFAM）下调TFAM表达，Mito-Tracker Red CMXRos染色结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位（MMP）、 MitoSOX^TM Red标记法检测线粒体活性氧（mtROS）水平、实时定量PCR检测线粒体DNA（mtDNA）的表达，免疫荧光细胞化学染色检测自噬体数量的变化。Western blot法检测TFAM、微管相关蛋白1轻链3A/B（LC3A/B）、自噬相关基因2A（ATG2A）、 ATG2B、 ATG9A、锌指转录因子Snail、基质金属蛋白酶2（MMP2）和MMP9的表达。CCK-8法、平板集落形成实验检测细胞增殖，Transwell^TM实验、划痕愈合实验检测细胞侵袭、迁移的变化。结果 下调TFAM表达导致HeLa及U2OS细胞MMP减少，mtDNA拷贝数减少，mtROS产生量增加。LC3A/B蛋白含量较对照组明显下降，胞质内自噬体数量明显减少，自噬早期阶段蛋白ATG2B、 ATG9A表达量明显减少。HeLa及U2OS细胞Snail、 MMP2和MMP9蛋白表达均减少。干扰TFAM表达，抑制HeLa及U2OS细胞的增殖、侵袭、迁移能力。结论 下调TFAM表达抑制线粒体功能，延缓自噬进程，降低宫颈癌细胞及骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力。

关键词

宫颈癌细胞 / 骨肉瘤细胞 / 线粒体转录因子A(TFAM) / 自噬 / 侵袭 / 迁移