小鼠抗寨卡病毒包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体的制备

摘要

目的 制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法 首先构建ZIKVEecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后，利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表达，经过变性、复性和超滤获得纯化的蛋白。将Eecto蛋白3次免疫后，获得多克隆抗体血清，进行效价测定，并利用ZIKVprME真核表达质粒转染的HEK293T细胞进行Westernblot法和免疫荧光法分析。取效价较高的小鼠脾脏制备脾细胞，与SP2/0骨髓瘤细胞融合，通过有限稀释法获取分泌抗体的杂交瘤细胞，并进一步制备腹水。对腹水进行抗体效价测定、亚类分析。以ZIKV同属病毒日本脑炎病毒(JEV)、黄热病病毒(YFV)、登革病毒1-4(DENV1-4)、蜱传脑炎病毒(TBEV)的Eecto为包被抗原，利用ELISA分析ZIKV单克隆抗体的交叉反应性，进一步对效价高、特异性强的抗体进行特异性分析。结果 成功构建了原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,并获得纯化的Eecto蛋白，该蛋白具有良好的免疫原性；制备筛选得到1D6、4F11、4H7、4F8四株单克隆抗体，其中三株(1D6、4H7、4F8)为IgGκ型抗体，一株(4F11)为IgMκ,1D6腹水效价大于1∶10～8;其中1D6和4H7为ZIKV特异性抗体，与其他黄病毒无交叉反应。结论 成功制备了小鼠抗ZIKVEecto单克隆抗体，为后续建立ZIKV检测方法及致病机制研究提供了实验材料。

关键词

寨卡病毒(ZIKV) / 包膜蛋白胞外区(Eecto) / 原核表达 / 单克隆抗体