靶向人表皮生长因子受体2嵌合抗原受体T(HER2-CAR-T)细胞毒性作用的体内外验证

摘要

目的 对靶向人表皮生长因子受体2嵌合抗原受体T(HER2-CAR-T)细胞进行毒理学评估，为其后期HER2-CAR-T细胞治疗的临床上评估提供安全性依据。方法 利用重组慢病毒载体制备HER2-CAR-T细胞，采用软琼脂集落形成实验，观察HER2-CAR-T细胞集落形成情况并对集落形成率进行统计分析；将HER2-CAR-T细胞悬液与兔红细胞悬液共孵，通过直接观察法以及酶标仪检测法评估红细胞溶解情况；对雄性新西兰兔耳缘静脉注射HER2-CAR-T细胞制剂，通过组织切片染色观察HER2-CAR-T细胞对动物血管的刺激作用；以pMD 2.G载体上的水泡性口炎病毒囊膜糖蛋白(VSV-G)基因为目标序列，利用荧光定量PCR进行慢病毒载体安全性的验证；取接受HER2-CAR-T细胞输注的小鼠心、肝、肺、肾，HE染色观察其病变情况。结果 成功制备了HER2-CAR-T细胞，这些细胞在体外不具备软琼脂集落形成能力，HER2-CAR-T细胞制剂对新西兰兔红细胞不产生溶血现象。新西兰兔耳缘静脉输注HER2-CAR-T细胞后未发现明显血管刺激反应，也未检测到VSV-G的特异性扩增，治疗组小鼠心、肝、肺、肾组织未见明显病变。结论 所制备的HER2-CAR-T细胞具有可靠安全性。

关键词

安全性 / 毒理学 / 靶向人表皮生长因子2嵌合抗原受体T(HER2-CAR-T)细胞 / 集落形成实验 / 溶血 / 血管刺激性 / 器官毒性