敲低双特异性磷酸酶5(DUSP5)通过阻断NF-κB信号抑制卡介苗诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎性反应

摘要

目的 探讨双特异性磷酸酶5(DUSP5)对卡介苗(BCG)介导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎性反应的调控作用。方法Western blot法检测BCG感染RAW264.7巨噬细胞0.5、 1、 2、 4、 6、 8、 12、 24 h,DUSP5表达变化；采用小干扰RNA(siRNA)技术下调RAW264.7巨噬细胞DUSP5水平，并设置siRNA阴性对照(si-NC)组、 DUSP5敲低(si-DUSP5)组、 si-NC联合BCG感染组、 si-DUSP5联合BCG感染组。实时定量PCR检测细胞白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、 IL-10的mRNA表达，ELISA检测细胞上清液IL-1β、 IL-6、 TNF-α、 IL-10含量；Western blot法检测细胞核因子κB(NF-κB)与磷酸化的NF-κB(p-NF-κB)表达变化。结果 BCG感染上调RAW264.7巨噬细胞核DUSP5蛋白表达，并在BCG刺激4 h后，DUSP5表达量达到高峰；与si-NC联合BCG感染组相比，敲低DUSP5抑制细胞促炎因子IL-1β、 IL-6与TNF-α表达与分泌，而抑炎因子IL-10表达不受DUSP5的影响；且敲低DUSP5抑制细胞NF-κB磷酸化。结论 敲低DUSP5通过阻断NF-κB信号抑制BCG介导的巨噬细胞炎性反应。

关键词

卡介苗(BCG) / 双特异性磷酸酶5(DUSP5) / RAW264.7巨噬细胞 / 炎性反应