苦豆碱通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路改善香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤

摘要

目的 探究苦豆碱(Alo)对香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤的作用及其可能的作用机制。方法 16HBE人支气管上皮细胞经100 mL/L香烟烟雾提取物(CSE)和(50、 100、 200)μmol/L Alo共处理后，CCK-8法检测细胞活力，试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)活性；原位末端转移酶标记技术(TUNEL)、 Western blot法检测细胞凋亡，ELISA检测炎性因子水平；2′, 7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针和相关试剂盒检测氧化应激水平；Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白表达水平。16HBE细胞经100 mL/L CSE和200μmol/L Alo共处理后，采用上述方法检测过表达TLR4对TLR4/NF-κB/NLRP3通路、细胞LDH活性、凋亡、炎症反应及氧化应激的影响。结果 CSE暴露可降低16HBE细胞活力，增加LDH释放和细胞凋亡，增强炎症反应和氧化应激水平，且激活TLR4/NF-κB/NLRP3通路；经Alo处理后，细胞活性升高，LDH释放减少、凋亡降低、炎症减轻、氧化应激水平下降，且TLR4/NF-κB/NLRP3通路失活；TLR4过表达可逆转Alo处理对CSE诱导的16HBE细胞损伤的保护作用。结论Alo可通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路减轻CSE诱导的人支气管上皮细胞损伤。

关键词

支气管上皮细胞 / 香烟烟雾 / 苦豆碱 / Toll样受体4(TLR4) / 核因子κB(NF-κB) / 含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)