IFN-γ/sPD-1联合过表达的小鼠骨髓间充质干细胞具有较高生物活性和遗传稳定性

摘要

目的 研究慢病毒介导的γ干扰素(IFN-γ)及可溶性程序性细胞死亡蛋白1(sPD-1)过表达对骨髓间充质干细胞(BMSC)生物活性及遗传稳定性的影响。方法 全骨髓贴壁法分离培养BMSC;流式细胞术鉴定BMSC表面标志物的表达；扩增分别带有绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)的IFN-γ及sPD-1基因序列，通过慢病毒转染分别构建IFN-γ、 sPD-1和IFN-γ/sPD-1双基因过表达的BMSC,采用倒置显微镜观察细胞形态，实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测IFN-γ和sPD-1的mRNA和蛋白表达；CCK-8法、 BMSC端粒酶活性检测法分析IFN-γ和sPD-1过表达BMSC的生物活性和遗传稳定性。结果 成功分离培养了CD44、 CD105阳性，CD34、 CD11b、 CD45阴性的BMSC。与空载体组相比，IFN-γ/sPD-1联合组的IFN-γ、 sPD-1 mRNA表达水平显著提高，但各组细胞生长情况类似。与空载体组相比，IFN-γ组端粒酶活性显著降低，但sPD-1组和IFN-γ/sPD-1联合组端粒酶活性变化不明显。结论 IFN-γ和sPD-1联合过表达的BMSC具有较高生物活性和遗传稳定性。

关键词

γ干扰素(IFN-γ) / 可溶性程序性细胞死亡蛋白1(sPD-1) / 骨髓间充质干细胞(BMSC) / 遗传稳定性