黏病毒抗性蛋白A(MxA)通过增强干扰素刺激应答元件(ISRE)活性诱导HepG2细胞干扰素刺激基因表达

摘要

目的 研究黏病毒抗性蛋白A(MxA)对HepG2细胞Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)途径的影响。方法 采用pcDNA3.1-Flag-MxA转染HepG2细胞，免疫荧光细胞化学染色检测MxA蛋白在HepG2细胞的表达和定位，Western blot法检测MxA蛋白表达；采用MxA小干涉RNA(si-MxA)转染HepG2细胞并以α干扰素(IFN-α)处理细胞，实时荧光定量PCR检测HepG2细胞黏液病毒抗性蛋白A(MxA)、蛋白激酶R(PKR)和寡聚腺苷酸合成酶(OAS)的mRNA表达，Western blot法检测MxA、PKR、OAS、细胞信号转导子与转录激活子1(STAT1)、磷酸化的STAT1(p-STAT1)、STAT2、p-STAT2和干扰素调节因子9(IRF9)的蛋白表达。此外，pcDNA3.1-Flag-MxA与pISRE-TA-luc分别共转染至HepG2和HepG2.2.15细胞，荧光素酶活性检测干扰素刺激应答元件(ISRE)活性。结果 MxA蛋白在HepG2细胞质和细胞核均有表达且细胞质表达量高于胞核。敲低HepG2细胞中MxA表达虽不影响IFN-α诱导的STAT1、p-STAT1、STAT2、p-STAT2和IRF9蛋白的表达，但显著降低抗病毒蛋白PKR和OAS的表达。过表达MxA的HepG2细胞ISRE活性增强且PKR和OAS蛋白表达增高，但这种效应却在HepG2.2.15细胞中被抑制。结论 MxA通过增强JAK/STAT信号通路ISRE活性诱导抗病毒蛋白表达。

关键词

黏病毒抗性蛋白A(MxA) / Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT) / 干扰素刺激应答元件(ISRE) / 干扰素刺激基因(ISG)