敲低IFI30通过激活STAT1抑制U251人胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移并促进其凋亡

摘要

目的 构建γ干扰素诱导蛋白30（IFI30）表达抑制的U251细胞，探讨IFI30表达受到抑制后对细胞生物学功能的影响及机制。方法 在线设计敲低靶点并合成3条小干扰RNA（siRNA）,转染后通过实时定量PCR技术检测抑制效率，选取抑制效率最高的siRNA序列构建短发夹RNA （shRNA）质粒。重组质粒与包装质粒共转染HEK293T细胞制备慢病毒。用慢病毒感染胶质瘤U251细胞，经嘌呤霉素筛选得到阳性细胞。采用CCK-8实验、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（EdU）实验和集落形成实验分析细胞增殖活性，流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡，Transwell^TM实验检测细胞侵袭、划痕实验检测细胞迁移。Western blot法检测细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、B细胞淋巴瘤因子2（Bcl2）、上皮钙黏蛋白（E-cadherin）和神经钙黏蛋白（N-cadherin）、信号转导子与转录激活子1（STAT1）。结果 筛选到有效的靶点序列并成功建立IFI30表达抑制的U251细胞。敲低IFI30的表达抑制U251细胞增殖，G0/G1期细胞比例增加，S期减少，细胞凋亡明显增加，细胞的侵袭和迁移能力降低。同时，U251细胞cyclin D1、Bcl2和N-cadherin的表达降低，E-cadherin, STAT1磷酸化表达增加。结论 敲低IFI30通过促进STAT1活化抑制U251细胞增殖、侵袭和迁移并促进其凋亡。

关键词

γ干扰素诱导蛋白30(IFI30) / 胶质瘤 / 细胞增殖 / 信号转导子与转录激活子1(STAT1) / 慢病毒