circCBLB抑制类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞增殖促进细胞凋亡并增加抗炎细胞因子水平

摘要

目的 探讨环状RNA Cbl原癌基因B(circCBLB)/miR-486-5p功能轴对类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、凋亡及炎症因子产生的影响。方法 人RA-FLS,用100μL的10 ng/mL肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激RA-FLS建立模型。采用双荧光素酶靶向验证circCBLB/miR-486-5p的结合关系。构建pcDNA3.1/siRNA-circCBLB、阴性对照(pcDNA3.1-NC/si-NC)和mimics-miR-486-5p,分别转染至RA-FLS。实验分为对照组、 TNF-α处理的RA-FLS、 pcDNA3.1-circCBLB组、 pcDNA3.1-NC组、 si-circCBLB组、 si-NC组、 pcDNA3.1-circCBLB联合miR-486-5p-mimics组。采用CCK-8法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡，平板集落形成实验检测细胞平板集落形成能力，实时定量PCR检测各组circCBLB、 miR-486-5p表达水平，ELISA检测各组细胞上清液抗炎因子白细胞介素4(IL-4)、 IL-10,促炎因子IL-6、 TNF-α水平。结果 双荧光素酶报告基因结果示circCBLB与miR-486-5p的3′非翻译区(3′UTR)结合；与同一时间点模型组细胞相比，过表达组细胞活力降低，干扰组升高；与模型组相比，过表达组凋亡率升高、 S和G2期的比例升高、集落形成率降低、 miR-486-5p表达水平降低、 IL-4、 IL-10水平升高，IL-6、 TNF-α水平降低；干扰组凋亡率降低、 S和G2期的比例降低、集落形成率升高、 miR-486-5p表达水平升高、 TNF-α水平升高；pcDNA3.1-circCBLB联合miR-486-5p-mimics组在circCBLB过表达的基础上，在细胞活力、细胞凋亡率、细胞周期、集落形成能力、抗炎因子的提高、促炎因子的降低方面对circCBLB的效应产生了抵消与逆转。结论 circCBLB抑制RA-FLS活力、提高细胞凋亡率、延长细胞周期降低细胞集落能力、提高抗炎因子，降低促炎因子，miR-486-5p则与circCBLB调控能力相反，且对circCBLB的效应具有一定的抵消与逆转能力。

关键词

环状RNA Cbl原癌基因B(circCBLB) / miR-486-5p / 细胞增殖 / 细胞凋亡 / 炎症因子