蛋白C受体(PROCR)在全葡聚糖颗粒(WGP)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞成熟中的作用

摘要

目的 探究蛋白C受体（PROCR）在全葡聚糖颗粒（WGP）作用下对小鼠骨髓源性树突状细胞（BMDC）成熟过程及其免疫相关功能的调控效应。方法 从NCBI的基因表达数据集（GEO）数据库中下载GSE2197数据集，随后通过深入分析该数据集的芯片数据，识别并获得了差异表达基因（DEG）。从免疫学数据库和分析门户网站（IMMPORT）数据库中下载并整理与免疫功能相关的基因，与DEG取交集得到免疫相关的差异基因。通过运用专门的R包等生物信息学算法，成功识别了关键基因并解析了相关的信号通路。实时定量PCR检测BMDC经WGP刺激前后的差异基因。在体外实验中，从小鼠的胫骨和腓骨中抽取骨髓，并利用FMS样酪氨酸激酶3配体（Flt-3L）诱导这些骨髓细胞分化成BMDC。经过诱导后，对这些BMDC进行转染处理，并随后使用WGP进行刺激。为了评估BMDC的免疫表型，利用流式细胞术分析了细胞表面分子CD40、CD80、CD86、主要组织相容性复合体Ⅰ/Ⅱ（MHC-Ⅰ/Ⅱ）以及程序性死亡蛋白1配体1（PD-L1）的表达情况。此外，为了探究BMDC的免疫调节功能，利用ELISA技术检测了BMDC上清液中细胞因子白细胞介素12p40（IL-12p40）、IL-6、IL-10的分泌含量。在T细胞实验中，我们利用OT-Ⅰ和OT-Ⅱ小鼠的淋巴结和脾脏，通过磁珠分选试剂盒成功分离出CD8⁺和CD4⁺ T细胞。随后，我们将这些T细胞与特异性抗原卵清蛋白（OVA）以及之前制备的BMDC进行共培养。最后，利用流式细胞术检测了T细胞的增殖与分化情况，以评估BMDC在抗原特异性T细胞反应中的作用。结果 经过分析WGP诱导的与CpG（GSE2197）刺激的BMDC的差异基因，与IMMPORT数据库中的免疫基因取交集，筛选到PROCR基因。数据显示敲低PROCR基因后，经WGP激发的BMDC的表面分子MHC-Ⅰ明显降低，细胞因子IL-10的分泌显著增多；其驱使CD8⁺T细胞产生γ干扰素（IFN-γ）的能力明显减弱。结论 在WGP诱导BMDC成熟的过程中，PROCR对MHC-Ⅰ的表达以及IL-10的分泌具有调控作用，进而调节BMDC诱导CD8⁺IFN-γ⁺T细胞增殖与分化的功能。

关键词

全葡聚糖颗粒 / 树突状细胞 / 免疫功能 / PROCR