Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体的制备及作用初步鉴定

摘要

目的 制备Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体，分析其生物活性及对CD36（+）血小板的吞噬影响。方法 通过杂交瘤细胞株RNA提取、 PCR扩增及序列分析获得单克隆抗体（mAb）32-106的V_H和V_L基因序列；利用基因合成和重组技术构建抗人CD36嵌合抗体轻、重链的表达载体；经Zeocin及杀稻瘟菌素筛选，获得稳定表达嵌合抗体的细胞株；利用亲和层析柱纯化抗体；SDS-PAGE检测嵌合抗体纯度及分子量；ELISA及流式细胞术测定抗体结合CD36抗原的活性；通过血小板吞噬实验分析嵌合抗体参与CD36（+）血小板吞噬的能力。结果 成功构建嵌合抗体轻、重链表达载体；共转染HEK293细胞后，经筛选及克隆化获得稳定表达嵌合抗体的细胞株；蛋白银染证实嵌合抗体的纯度高及分子量正确；流式细胞术及ELISA结果表明嵌合抗体具有结合人CD36抗原的活性；血小板吞噬实验表明Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体基本丧失介导单核细胞吞噬CD36（+）血小板的能力。结论 本研究成功制备了Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体，并在体外证实其丧失介导CD36（+）血小板清除的能力，为修饰抗体用于CD36抗体介导的胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症（FNAIT）治疗研究奠定了理论基础。

关键词

CD36 / 嵌合抗体 / 人胚肾细胞 / 血小板吞噬