正常人外周血中性粒细胞表型和功能鉴定

摘要

目的 正常人外周血中性粒细胞的表型和功能鉴定。方法 采用密度梯度离心法和红细胞裂解方法分离正常人外周血中性粒细胞，利用多重免疫荧光染色和流式细胞术分析中性粒细胞表面标记，及其在中性粒细胞亚群中的分布特征。通过pHrodo^TM Green E.coli BioParticles^TM吞噬实验检测中性粒细胞吞噬功能。利用Wright-Giemsa染色和免疫荧光染色，分别在光学显微镜和激光共聚焦显微镜下，观察体外刺激中性粒细胞产生中性粒细胞胞外陷阱（NET）的形态学特征。结果 正常人外周血中性粒细胞高表达表面标记CD66b、 CD11b和CD16,且CD16分子表达百分率高于CD11b。中性粒细胞可根据CD16分子表达密度不同分为CD16^hi、 CD16^int和CD16^lo三个亚群，其中CD16^hi细胞亚群的百分率远高于CD16^int细胞亚群和CD16^lo细胞亚群。中性粒细胞亚群均表达抑制性分子程序性死亡配体1（PD-L1）,但在三个亚群的表达无明显差异；抑制性分子CD300LD在CD16^hi细胞亚群的表达明显高于其在CD16^int细胞亚群和CD16^lo细胞亚群中的表达。中性粒细胞亚群均高表达黏附分子CD62L,且三个亚群无明显差异。pHrodo^TM Green E.coli BioParticles^TM在CD16^int亚群上的平均荧光强度（MFI）值高于其在CD16^hi和CD16^lo亚群上的MFI值，且其在CD16^hi亚群的MFI值高于CD16^lo亚群。Wright-Giemsa染色结果显示，正常人外周血中性粒细胞多呈现分叶核形态；经佛波酯（PMA）刺激后，细胞核不再呈现分叶状态，并产生网状结构。激光共聚焦结果显示，中性粒细胞经PMA刺激后，中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）释放增加，并呈现网状结构。结论 正常人外周血中性粒细胞存在异质性，不同中性粒细胞亚群表面标记分子的表达存在差异，可能发挥不同的免疫功能；PMA可刺激中性粒细胞产生NET,不同中性粒细胞亚群产生NET能力的差异则有待进一步研究。

关键词

中性粒细胞 / 免疫表型 / 吞噬作用 / 中性粒细胞胞外陷阱