新风胶囊通过抑制lncRNA HOTAIR/PI3K/AKT通路减轻RA-FLS诱导的HUVEC血管新生反应

摘要

目的 探讨新风胶囊（XFC）含药血清对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（RA-FLS）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）血管新生的影响及其作用机制。方法 建立RA-FLS与HUVEC共培养体外模型；SD大鼠灌胃制备XFC含药血清；CCK-8法筛选最佳共培养比例和XFC含药血清浓度；构建lncRNA HOTAIR过表达质粒（pcDNA3.1-lncRNA HOTAIR）及阴性对照组，转染至RA-FLS中。实验分为HUVEC对照组、模型组（HUVEC和RA-FLS共培养）、XFC组（200 mL/LXFC处理共培养RA-FLS）、HOTAIR阴性对照组（pcDNA3.1-NC转染共培养RA-FLS）、HOTAIR过表达组（pcDNA3.1-lncRNA HOTAIR转染共培养RA-FLS）、XFC处理的HOTAIR过表达组（200 mL/L XFC处理pcDNA3.1-lncRNA HOTAIR转染的共培养RA-FLS）。采用CCK-8法检测HUVEC增殖能力；Transwell^TM法检测HUVEC迁移能力；小管形成实验检测HUVEC成管能力；流式细胞术检测HUVEC中CD34及CD105的表达；实时定量PCR检测HUVEC中lncRNA HOTAIR、miR-126-3p、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、PI3K受体2（PIK3R2）、AKT、血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）mRNA的表达；Western blot法和免疫荧光技术检测HUVEC中PI3K、AKT、p-AKT、VEGF、bFGF蛋白表达。结果 CCK-8法结果显示，RA-FLS与HUVEC最佳处理比例和时间分别为5∶1和48 h,XFC的最佳干预浓度和时间分别为200 mL/L和48 h。与对照组相比，模型组HUVEC增殖、迁移、成管能力及CD34和CD105水平显著提高，lncRNA HOTAIR、PIK3R2、VEGF、bFGF、PI3K、AKT、p-AKT的表达明显上调，miR-126-3p显著下调；与模型组相比，XFC组HUVEC增殖、迁移、成管能力及CD34和CD105水平显著下降，lncRNA HOTAIR、PIK3R2、VEGF、bFGF、PI3K、AKT、p-AKT的表达明显下调，miR-126-3p显著上调；与HOTAIR阴性对照组相比，HOTAIR过表达组，HUVEC增殖、迁移、成管能力及CD34和CD105水平显著提高，lncRNAHOTAIR、PIK3R2、VEGF、bFGF、PI3K、AKT、p-AKT的表达明显上调，miR-126-3p显著下调；与HOTAIR过表达组相比，XFC处理的HOTAIR过表达组HUVEC增殖、迁移、成管能力及CD34和CD105水平显著下降，lncRNAHOTAIR、PIK3R2、VEGF、bFGF、PI3K、AKT、p-AKT的表达明显下调，miR-126-3p显著上调。结论 XFC含药血清可能通过抑制lncRNA HOTAIR/PI3K/AKT通路的表达，降低VEGF、bFGF的表达水平，减轻关节滑膜血管新生而发挥治疗作用。

关键词

类风湿关节炎 / 新风胶囊(XFC) / 人脐静脉内皮细胞(HUVEC) / 滑膜成纤维细胞(FLS) / 长链非编码RNA同源盒转录本基因间RNA(lncRNA HOTAIR) / 磷脂酰肌醇3激酶(PI3K) / 蛋白激酶B(AKT) / 血管新生