微小脲原体UP3-RS02445生物信息学分析及单克隆抗体的制备

陈恒鑫, 贾晓晖, 李雅惠, 周艳, 贾天军, 李萍

细胞与分子免疫学杂志 ›› 2024, Vol. 40 ›› Issue (11) : 1011 -1017.

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细胞与分子免疫学杂志 ›› 2024, Vol. 40 ›› Issue (11) : 1011 -1017. DOI: 10.13423/j.cnki.cjcmi.009869

微小脲原体UP3-RS02445生物信息学分析及单克隆抗体的制备

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摘要

目的 对微小脲原体UP3-RS02445功能进行生物信息学分析,进而构建其重组表达载体,并制备单克隆抗体(mAb)。方法 利用生物信息学分析软件,对UP3-RS02445蛋白功能进行分析。构建UP3-RS02445重组表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导并纯化蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备抗UP3-RS02445 mAb,分别使用Western blot法和ELISA方法检测mAb的特异性和效价。使用mAb亚型测定试纸条检测mAb的重链亚型和轻链亚型。结果 生物信息学分析表明,UP3-RS02445蛋白由201个氨基酸组成,无跨膜结构域和信号肽,属于非分泌蛋白。成功构建UP3-RS02445重组表达载体并能够诱导重组蛋白的大量表达,细胞融合后经ELISA和Western blot法筛选获得两株分泌UP3-RS02445 mAb的杂交瘤细胞(A1H5和A4E2)。ELISA结果显示mAb的效价为1∶2560,Western blot法和免疫荧光技术结果均表明mAb可与UP3-RS02445蛋白特异性结合。两株mAb的重链亚型为IgG1,轻链亚型为Kappa型。结论 成功制备了特异性强、效价高的UP3-RS02445 mAb,为后续UP诊断试剂的开发及蛋白功能的研究奠定了基础。

关键词

微小脲原体(UP) / 生物信息学 / 原核表达 / 蛋白纯化 / 单克隆抗体

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陈恒鑫, 贾晓晖, 李雅惠, 周艳, 贾天军, 李萍 微小脲原体UP3-RS02445生物信息学分析及单克隆抗体的制备[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2024, 40(11): 1011-1017 DOI:10.13423/j.cnki.cjcmi.009869

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