微小脲原体UP3-RS02445生物信息学分析及单克隆抗体的制备

摘要

目的 对微小脲原体UP3-RS02445功能进行生物信息学分析，进而构建其重组表达载体，并制备单克隆抗体(mAb)。方法 利用生物信息学分析软件，对UP3-RS02445蛋白功能进行分析。构建UP3-RS02445重组表达载体，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导并纯化蛋白免疫雌性BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术制备抗UP3-RS02445 mAb,分别使用Western blot法和ELISA方法检测mAb的特异性和效价。使用mAb亚型测定试纸条检测mAb的重链亚型和轻链亚型。结果 生物信息学分析表明，UP3-RS02445蛋白由201个氨基酸组成，无跨膜结构域和信号肽，属于非分泌蛋白。成功构建UP3-RS02445重组表达载体并能够诱导重组蛋白的大量表达，细胞融合后经ELISA和Western blot法筛选获得两株分泌UP3-RS02445 mAb的杂交瘤细胞(A1H5和A4E2)。ELISA结果显示mAb的效价为1∶2560,Western blot法和免疫荧光技术结果均表明mAb可与UP3-RS02445蛋白特异性结合。两株mAb的重链亚型为IgG1,轻链亚型为Kappa型。结论 成功制备了特异性强、效价高的UP3-RS02445 mAb,为后续UP诊断试剂的开发及蛋白功能的研究奠定了基础。

关键词

微小脲原体(UP) / 生物信息学 / 原核表达 / 蛋白纯化 / 单克隆抗体