姜黄素调节LKB1-AMPK-LC3信号通路对膀胱癌细胞增殖、迁移和顺铂耐药性的影响

摘要

目的 研究姜黄素调节肝激酶B1-磷酸腺苷激活的蛋白激酶-微管相关蛋白1轻链3(LKB1-AMPK-LC3)信号通路对膀胱癌细胞增殖、迁移和顺铂(DDP)耐药性的影响。方法 体外培养人膀胱癌细胞系T24细胞，用DDP诱导建立其DDP耐药细胞T24/DDP细胞，用不同浓度姜黄素处理T24和T24/DDP细胞后以MTT法筛选姜黄素最佳作用浓度。将T24细胞随机分为对照组、姜黄素组、二甲双胍组、姜黄素联合二甲双胍组，用姜黄素和LKB1-AMPK激活剂二甲双胍分组处理后以MTT法、单丹磺酰戊二胺(MDC)荧光染色法、细胞划痕法、流式细胞术分别检测各组T24细胞增殖、自噬、迁移与凋亡；Western blot法检测各组T24细胞LKB1-AMPK-LC3信号通路相关蛋白表达。将T24/DDP细胞随机分为对照组、姜黄素组、二甲双胍组、姜黄素联合二甲双胍组，用姜黄素和二甲双胍分组处理的同时用不同浓度DDP处理，然后以MTT法检测姜黄素对T24/DDP细胞DDP耐药系数的影响。将T24/DDP细胞随机分为对照组、 DDP组、 DDP联合姜黄素组、 DDP联合二甲双胍组、 DDP和姜黄素联合二甲双胍组，用DDP、姜黄素和二甲双胍分组处理后以同样方法检测各组T24/DDP细胞增殖、自噬、迁移、凋亡、耐药与LKB1-AMPK-LC3信号通路相关蛋白表达。结果 相比对照组，姜黄素组T24细胞活力、自噬体相对数、迁移率、磷酸化的LKB1(p-LKB1)/LKB1、磷酸化的AMPK(p-AMPK)/AMPK与LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、 T24/DDP细胞DDP耐药系数降低，T24细胞凋亡率升高；二甲双胍组各指标变化与姜黄素组相反。相比姜黄素组，姜黄素联合二甲双胍组T24细胞活力、自噬体相对数、迁移率、 p-LKB1/LKB1、 p-AMPK/AMPK与LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、 T24/DDP细胞DDP耐药系数升高，T24细胞凋亡率降低。相比对照组，DDP组T24/DDP细胞各指标无明显变化。相比对照组、 DDP组，DDP联合姜黄素组T24/DDP细胞活力、自噬体相对数、迁移率、 P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达、 p-LKB1/LKB1、 p-AMPK/AMPK与LC3Ⅱ/LC3Ⅰ降低，T24/DDP细胞凋亡率升高；DDP联合二甲双胍组上述各指标变化与DDP联合姜黄素组相反。相比DDP联合姜黄素组，DDP和姜黄素联合二甲双胍组T24/DDP细胞活力、自噬体相对数、迁移率、 P-gp蛋白表达、 p-LKB1/LKB1、 p-AMPK/AMPK与LC3Ⅱ/LC3Ⅰ升高，T24/DDP细胞凋亡率降低。结论 姜黄素可降低LKB1-AMPK-LC3信号通路活性，进而抑制膀胱癌细胞自噬、增殖与迁移，促使其凋亡，并减弱其DDP耐药性。

关键词

姜黄素 / LKB1-AMPK-LC3 / 膀胱癌 / 增殖 / 迁移 / 顺铂耐药性