重组真核细胞抗原免疫小鼠制备抗人LAG3单克隆抗体及其鉴定

摘要

目的 制备小鼠抗人淋巴细胞活化基因3(LAG3)单克隆抗体(mAb)并进行抗体免疫学鉴定。方法 以构建的稳定表达人LAG3胞外区和跨膜区的小鼠3T3单克隆细胞(LAG3-mLumin-3T3)免疫BALB/c小鼠，流式细胞术和免疫荧光法检测小鼠血清中是否含有抗人LAG3抗体。用SP2/0细胞皮下注射BALB/c小鼠形成实体骨髓瘤，体外分离的小鼠骨髓瘤细胞与免疫小鼠的脾细胞融合建立杂交瘤，用有限细胞稀释法分离出杂交瘤单克隆细胞。收集杂交瘤单克隆细胞培养液，流式细胞术检测细胞分泌LAG3 mAb。构建的表达LAG3胞外区4个独立结构域的3T3细胞株(LAG3-胞外结构域1/-2/-3/-4-3T3)用于流式细胞术区分mAb结合抗原表位。流式细胞术检测LAG3 mAb与活化状态下的人外周血单核细胞(PBMC)共同培养前后细胞LAG3表达。结果 重组真核细胞抗原免疫后小鼠能产生特异性抗人LAG3抗体。通过杂交瘤融合获得的杂交瘤单克隆细胞能够分泌小鼠抗人LAG3 mAb;不同单克隆细胞株分泌的mAb识别的LAG3抗原结构域存在差异。结论 成功制备小鼠抗人LAG3 mAb,不同杂交瘤细胞克隆分泌的mAb识别表位不同，为进一步研究LAG3生物学特性及肿瘤治疗阻断抗体的研发奠定基础。

关键词

淋巴细胞活化基因3(LAG3) / 真核细胞抗原 / 活体骨髓瘤细胞 / 杂交瘤 / 单克隆抗体(mAb)