miR-373靶向调控JAK2/STAT6信号通路抑制肿瘤相关巨噬细胞M2型极化对直肠癌细胞的影响

摘要

目的 探究miR-373和Janus激酶2/信号转导及转录激活因子6（JAK2/STAT6）信号通路对直肠癌中肿瘤相关巨噬细胞（TAM）向M2型极化的影响。方法 将THP-1细胞诱导为M0/M1/M2型巨噬细胞，M0型巨噬细胞与Caco-2细胞共培养获得TAM,流式细胞术检测CD86、 CD206表达，实时定量PCR、 Western blot法检测miR-373、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、 Toll样受体4（TLR-4）、白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、精氨酸酶1（Arg1）、几丁质酶样3 （Ym1）、抵抗素样α （Fizz1）、 IL-10 mRNA和蛋白水平。TAM进行细胞转染，分为过表达miR-373组（miR-373-TAM）及其对照组（miR-NC-TAM）、过表达miR-373和JAK2组（miR-373联合JAK2-TAM）及其对照组（miR-373联合NC-TAM）,随后与Caco-2细胞共培养。流式细胞术检测TAM中CD206表达；实时定量PCR、 Western blot法检测TAM中miR-373、 Arg1、 Ym1、 Fizz1、 IL-10、 JAK2、 STAT6 mRNA和蛋白水平；CCK-8实验、集落形成实验、 Transwell^TM实验检测Caco-2细胞增殖、侵袭和迁移能力。30只裸鼠随机分为Caco-2细胞组、 Caco-2细胞联合miR-NC-TAM组、 Caco-2细胞联合miR-373-TAM组，每组各10只。各组大鼠分别皮下注射单纯Caco-2细胞，Caco-2细胞联合TAM,Caco-2细胞联合过表达miR-373的TAM。细胞接种4周后，免疫荧光染色检测肿瘤组织F4/80⁺CD206⁺细胞水平；实时定量PCR、 Western blot法检测肿瘤组织miR-373、 JAK2、 STAT6、 Arg1、 Ym1、 Fizz1、 IL-10 mRNA和蛋白水平。结果 TAM趋向于向M2型极化。过表达miR-373后，TAM中miR-373水平升高，Arg1、 Ym1、 Fizz1、 IL-10、 JAK2、 STAT6 mRNA和蛋白水平降低，Caco-2细胞增殖、侵袭、迁移能力降低；过表达JAK2能够部分逆转过表达miR-373对TAM向M2型极化以及对Caco-2细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。TAM能够促进肿瘤生长；过表达miR-373能够抑制肿瘤生长并抑制TAM向M2型极化。结论 miR-373能够抑制直肠癌中TAM向M2型极化，miR-373可能通过调控JAK2/STAT6通路抑制直肠癌细胞的增殖和转移。

关键词

直肠癌 / miR-373 / JAK2/STAT6信号通路 / 肿瘤相关巨噬细胞 / M2型极化