人源性抗SARS-CoV-2单链抗体文库的构建及广谱中和抗体的筛选与鉴定

摘要

目的 构建人源性抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)单链可变片段(scFv)抗体文库，并筛选具有广谱中和活性的抗体，为诊断和治疗制剂的开发提供候选分子。方法 从新型冠状病毒感染康复者外周血中分离单个核淋巴细胞(PBMC),提取总RNA,逆转录成cDNA,以此为模板构建人源性抗SARS-CoV-2 scFv抗体文库；利用噬菌体展示技术筛选对SARS-CoV-2 S蛋白具有特异性的scFv抗体。通过序列分析和人源IgG抗体表达，合成IgG全抗体，并评估其对SARS-CoV-2的结合能力及中和活性。结果 成功构建了库容量为1.56×10～7 CFU的SARS-CoV-2人源性scFv抗体文库，筛选出两种特异性scFv抗体；并将scFv抗体表达成IgG形式的全抗体(IgG-A10和IgG-G6),其中IgG-A10对SARS-CoV-2原始株(WT)和奥密克戎亚型变异毒株XBB(XBB)毒株均具有较好中和活性，对奥密克戎BA.2.86变异株的第二代亚分支JN.1(JN.1)毒株中和效果一般。结论 本研究从康复者外周血中成功构建了人源性抗SARS-CoV-2 scFv抗体文库，并筛选表达出具有中和活性的抗SARS-CoV-2 IgG抗体，为SARS-CoV-2感染的预防、诊断和治疗奠定了基础。

关键词

SARS-CoV-2 / 单链可变片段(scFv) / 噬菌体展示技术 / 中和抗体