miR-15b-5p通过USP9X影响PIK3CA/AKT1通路缓解哮喘气道炎症

摘要

目的 研究miR-15b-5p是否能通过负调控泛素特异性肽酶9X(USP9X)下调磷脂酰肌醇4, 5-二磷酸3-激酶催化亚基α/AKT丝氨酸/苏氨酸激酶1(PIK3CA/AKT1)通路的表达，从而缓解哮喘气道炎症。方法 通过在线数据库(miRWalk)预测USP9X可能是miR-15b-5p的直接靶点，并进行了荧光素酶报告基因检测验证。通过免疫共沉淀(CO-IP)验证了USP9X与PIK3CA之间能否直接结合以及USP9X和其小分子抑制剂WP1130在PIK3CA的去泛素化中作用。取C57小鼠，随机分为Control组、 OVA组、 OVA联合NC组以及miR-15b-5p agomir治疗组，每组10只。BEAS-2B细胞用白细胞介素13(IL-13)诱导，并用miR-15b-5p mimic治疗。进行了HE、 Masson、 PAS、免疫组织化学、免疫荧光染色及流式细胞术、 Western blot法、实时定量PCR检测。结果 发现给予miR-15b-5p agomir和mimic后能够减少支气管周围炎性细胞，改善气道炎症，并且miR-15b-5p能靶向负调控USP9X。USP9X能够与PIK3CA直接结合，以蛋白酶体依赖性方式调节PIK3CA水平，并且USP9X对K29连接的PIK3CA蛋白起去泛素化作用，下调USP9X会使PIK3CA的泛素化水平增加。USP9X的小分子抑制剂WP1130与敲低USP9X作用一致，均能够增加PIK3CA的泛素化水平，使PIK3CA的蛋白水平降低。结论 miR-15b-5p/USP9X/PIK3CA/AKT1信号通路可能为哮喘提供潜在的治疗靶点。

关键词

miR-15b-5p / USP9X / PIK3CA / AKT1 / 泛素化 / 哮喘