LncRNA EFRL在同型半胱氨酸致动脉粥样硬化巨噬细胞胞葬中的作用及机制研究

摘要

目的 探究胞葬作用相关长链非编码RNA(EFRL)在同型半胱氨酸(Hcy)致动脉粥样硬化(AS)巨噬细胞胞葬作用中的影响及其作用机制。方法 体外培养RAW264.7巨噬细胞，设立对照组(0μmol/L Hcy)和Hcy干预组(100μmol/L Hcy), Hcy干预的巨噬细胞转染锁核苷酸(GapmeR)后设置EFRL敲低阴性对照组(Hcy联合LNA-NC)和EFRL敲低组(Hcy联合LNA-EFRL);高通量测序获得差异性表达LncRNA MSTRG.88917.16(EFRL),基因组浏览器(UCSC)分析保守性，转录本蛋白编码潜能预测工具(CPC)和转录本蛋白编码能力预测软件(CPAT)分析编码蛋白能力，基因本体数据库(GO)和基因组破译方面的数据库(KEGG)分析相关生物学功能；核质分离法和RNA-FISH检测EFRL在巨噬细胞中定位；实时定量PCR检测Hcy干预的巨噬细胞中EFRL及靶基因遗传性痉挛性截瘫4型基因(SPAST)的表达水平；流式细胞术检测紫外线诱导的Jurkat细胞凋亡率；免疫荧光技术结合体外巨噬细胞胞葬实验分析巨噬细胞胞葬作用；ELISA检测炎症相关因子白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-18含量。结果 鉴定新的LncRNA MSTRG.88917.16并命名为EFRL(Efferocytosis Relatived LncRNA,胞葬作用相关长链非编码RNA); UCSC、 CPC、 CPAT明确EFRL保守性高且不具备编码蛋白能力，GO、 KEGG功能富集分析显示EFRL可能参与巨噬细胞胞葬作用；核质分离法和RNA-FISH检测EFRL定位于巨噬细胞细胞核；与对照组相比，Hcy组中EFRL及靶基因SPAST表达水平增高；与对照组(0 min)相比较，实验组(15、 30 min)凋亡率Annexin V>85%;与Hcy联合LNA-NC组相比，Hcy联合LNA-EFRL组中巨噬细胞胞葬作用增强，介导的炎症因子含量降低；与Hcy联合LNA-NC组相比，Hcy联合LNA-EFRL组中SPAST表达水平降低。结论降低EFRL的表达能够缓解Hcy抑制巨噬细胞胞葬作用的过程，其机制与EFRL调控下游靶基因SPAST有关。

关键词

胞葬作用 / 同型半胱氨酸(Hcy) / 动脉粥样硬化(AS) / 长链非编码RNA