基于FTO调控Notch1通路观察阳和平喘颗粒对哮喘BMSC归巢的影响

摘要

目的 观察N⁶甲基腺嘌呤（m⁶A）甲基化调控缺刻基因1（Notch1）通路对哮喘骨髓间充质干细胞（BMSC）归巢的影响，以及中药复方阳和平喘颗粒干预研究。方法 采用大鼠BMSC和支气管上皮细胞共培养的方式。将提取的细胞分为支气管上皮细胞组、哮喘支气管上皮细胞联合间充质干细胞共培养组（以下简称共培养组）、共培养细胞联合正常血清组、共培养细胞联合最佳含药血清组、 siRNA-FTO联合正常血清组、 siRNA-FTO-NC联合正常血清组、 siRNA-FTO联合最佳含药血清组。检测共培养细胞活力和细胞周期变化；免疫荧光染色法检测BMSC归巢水平和归巢标志物；实时定量PCR检测Notch1通路相关基因的表达；Western blot法检测Notch1通路相关蛋白的表达。结果 与支气管上皮细胞组比较，共培养细胞组BMSC归巢水平和趋化因子受体4（CXCR4）、人基质细胞衍生因子1（SDF-1）、Notch1、重组信号结合蛋白J（RBP-J）、发状分裂相关增强子1（Hes1）蛋白表达升高。与共培养细胞组、共培养细胞联合正常血清组比较，共培养细胞联合最佳含药血清组BMSC归巢水平及CXCR4、 SDF-1表达升高，Notch1、 Hes1蛋白mRNA表达降低。与siRNA-FTO-NC联合正常血清组比较，siRNA-FTO联合正常血清组Notch1、 Activated Notch1、 RBP-J、 Hes1蛋白表达和细胞活力升高，BMSC归巢水平降低。与siRNA-FTO联合正常血清组比较，siRNA-FTO联合最佳含药血清组Notch1、 RBP-J mRNA, Activated Notch1、 Hes1蛋白表达降低，BMSC归巢水平升高，共培养细胞联合最佳含药血清组Notch1、 RBP-J、 Hes1 mRNA表达降低。与siRNA-FTO联合最佳含药血清组比较，共培养细胞联合最佳含药血清组细胞活力及Notch1、 Activated Notch1、 RBP-J、 Hes1蛋白降低，BMSC归巢水平升高。结论 阳和平喘颗粒可能通过上调FTO表达，抑制下游Notch1信号通路表达，从而促进哮喘BMSC归巢，减轻哮喘炎症。

关键词

骨髓间充质干细胞（BMSC） / 支气管哮喘 / N⁶甲基腺嘌呤（m⁶A） / Notch1信号通路