唾液样本CHGA夹心ELISA方法的建立及其在应激检测中的初步应用

摘要

目的 建立定量检测唾液中嗜铬粒蛋白A (CHGA)的双抗体夹心ELISA方法，并探究其在唾液样本检测中的初步应用。方法 人CHGA重组蛋白免疫BALB/c小鼠，常规杂交瘤技术制备、筛选单克隆抗体(mAb);构建双抗体夹心ELISA检测方法，优化唾液样本基质效应，并应用该方法检测应激人群唾液中的CHGA浓度。结果 获得21株稳定分泌抗人CHGA的高效价杂交瘤细胞株。经方阵ELISA筛选出一对效果最佳的检测抗体，优化确定了最佳包被浓度为10μg/mL,最佳检测抗体稀释度为1∶32 000。该方法的准确性及可重复性验证结果良好，批内和批间变异率均在15%以内，回收率在80%～120%之间。进一步对基质效应进行优化，使之适用于唾液样本检测；采集不同应激状态人群唾液样本，使用本研究方法检测CHGA水平，结果提示其具有反映应激强度的潜力。结论 成功建立了可靠的唾液CHGA检测方法，并初步探索其作为生物标志物在应激相关研究中的应用价值。

关键词

嗜铬粒蛋白A(CHGA) / 单克隆抗体(mAb) / 生物标志物 / 应激 / 唾液