miR-148a通过Wnt3a/β-catenin影响巨噬细胞M2型极化抑制肝癌细胞增殖的作用机制研究

摘要

目的 探讨miR-148a通过Wnt3a/β联蛋白（β-catenin）影响巨噬细胞M2型极化抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法实时定量PCR检测84名肝癌患者肿瘤组织和相应的邻近非肿瘤肝组织中miR-148a、CD206、白细胞介素10（IL-10） mRNA表达水平；将THP-1细胞分为空白组（常规培养）、M2组（200 nmol/L佛波酯、20 ng/mL IL-4、20 ng/mL IL-13）、M2联合阴性对照（miR-NC）组（在M2组基础上转染miR-NC）、M2联合miR-148a模拟物（miR-148a mimics）组（在M2组基础上转染miR-148a mimics）、M2和miR-148a mimics联合Wnt3a组（在M2联合miR-148a mimics组基础上，加入100μg/L Wnt3a处理）; CCK-8、EdU法检测HuH7细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡及M2型巨噬细胞标志物CD206;化学发光法检测细胞上清液中IL-10水平；实时定量PCR检测细胞中miR-148a、CD206、IL-10 mRNA表达水平；Western blot法检测Wnt3a、β-catenin表达。结果肿瘤组织CD206、IL-10 mRNA、Wnt3a、β-catenin表达高于非肿瘤肝组织，miR-148a降低；M2型巨噬细胞标志物CD206、IL-10 mRNA表达明显增加；与空白组相比，M2组A₄₅₀值、EdU阳性率、CD206、IL-10 mRNA表达、上清液中IL-10水平、Wnt3a、β-catenin表达增加，凋亡率、miR-148a降低；与M2组、M2联合miR-NC组相比，M2联合miR-148a mimics组A₄₅₀值、EdU阳性率、CD206、IL-10 mRNA表达、上清液中IL-10水平、Wnt3a、β-catenin表达降低，凋亡率、miR-148a增加；Wnt3a逆转了过表达miR-148a对肝癌细胞增殖的抑制作用。结论 过表达miR-148a抑制巨噬细胞M2型极化进而阻止肝癌细胞增殖，可能与抑制Wnt3a/β-catenin通路有关。

关键词

巨噬细胞 / miR-148a / M2型极化 / 肝癌细胞 / 增殖 / Wnt3a/β-catenin通路