牛CD4单克隆抗体的制备及其鉴定

摘要

目的 制备抗牛CD4的单克隆抗体，并对其进行基本生物学特性鉴定。方法 通过构建牛CD4基因原核质粒，成功表达并纯化出重组牛CD4(rHis-BoCD4和rGST-BoCD4)。利用杂交瘤技术制备抗牛CD4单克隆抗体，通过ELISA对单克隆抗体亚型和效价进行鉴定和分析，使用间接免疫荧光实验、Western blot法分析其特异性。结果 成功获得了四株稳定分泌BoCD4单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为1H4、6A10、3F9和4G10。亚类鉴定单克隆抗体亚类6A10为IgG2b,其余单克隆抗体均为IgM型。Western blot结果显示，4株牛CD4单克隆抗体均可与体外表达的牛CD4蛋白发生特异性结合。间接免疫荧光实验表明4株单克隆抗体均能够特异性识别天然牛CD4蛋白。流式细胞术检测结果显示，3F9识别牛天然CD4分子的能力最强。结论 成功制备了4株特异性强且能识别天然牛CD4蛋白的单克隆抗体，为后续研究牛CD4分子的功能、牛T淋巴细胞疾病的诊断及治疗方法的建立奠定基础。

关键词

牛CD4 / 单克隆抗体 / 原核表达