TPT1-AS1靶向miR-324/TWIST1轴调控上皮性卵巢癌细胞侵袭、迁移及血管生成的分子机制

摘要

目的 探究肿瘤蛋白翻译调控1反义RNA1（TPT1-AS1）靶向miR-324/核转录因子扭曲相关蛋白1（TWIST1）轴调控上皮性卵巢癌（EOC）细胞的增殖、侵袭、迁移及血管生成从而影响卵巢癌（OC）发展的作用机制。方法 实时定量PCR检测29例OC灶及癌旁组织样本中TPT1-AS1和miR-324的表达；构建“TPT1-AS1过表达”与“miRNA324敲除”的两种OC细胞模型，并采用CCK-8、 Transwell^TM和划痕试验法检测细胞增殖、侵袭和迁移能力；Western blot法检测TWIST1、上皮钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、血管内皮生长因子A（VEGF-A）的蛋白表达；荧光原位杂交实验、 RNA下拉实验验证TPT1-AS1与miR-324之间的相互作用；免疫组织化学染色法检测、 Targetscan生物信息学分析验证miR-324的表达对上皮-间质转化（EMT）过程及血管生成有负调控作用。结果 TPT1-AS1在OC组织中的表达水平显著高于癌旁组织，而miR-324的表达水平在OC组织中则显著低于癌旁组织。在TPT1-AS1过表达的人卵巢癌细胞株SKOV3细胞中，miR-324的表达水平明显下降，TPT1-AS1与miR-324呈显著负相关。实验还发现，TPT1-AS1与miR-324在OC细胞中共同表达，并且二者之间存在直接结合关系。下调miR-324显著促进了SKOV3细胞的增殖、侵袭和迁移能力。进一步研究发现miR-324与EMT关键转录因子TWIST1 3′-UTR端有结合位点，抑制miR-324表达可以上调TWIST1的转录水平，从而导致E-cadherin蛋白表达的下降和Vimentin蛋白表达的上升。此外，miR-324下调时，VEGF-A蛋白表达水平上升。结论 本研究揭示了TPT1-AS1通过负调控miR-324/TWIST1轴促进EOC细胞增殖、侵袭、迁移以及血管生成，从而促进OC的发展，这些发现为OC的诊断和治疗提供了新的潜在靶点。

关键词

卵巢癌(OC) / 上皮-间质转化(EMT) / TWIST1 / miR-324 / 血管生成