mTOR通过抑制自噬促进oxLDL诱导血管平滑肌细胞铁死亡

摘要

目的 探讨雷帕霉素靶蛋白（mTOR）在氧化低密度脂蛋白（oxLDL）诱导血管平滑肌细胞（VSMC）铁死亡中的作用及机制。方法 通过构建oxLDL诱导VSMC铁死亡模型，利用mTOR抑制剂雷帕霉素或自噬诱导剂羰基氰化物间氯苯腙（CCCP）联合处理VSMC,检测自噬和铁死亡相关指标的变化。采用实时定量PCR、 Western blot法检测mTOR、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、螯合体1（p62）和微管相关蛋白1轻链3（LC3）的表达；流式细胞术检测VSMC死亡情况；C11 BODIPY荧光染色检测细胞脂质过氧化水平；比色法测定丙二醛（MDA）、亚铁离子(Fe²⁺)和谷胱甘肽（GSH）含量。结果 oxLDL可显著上调VSMC中mTOR表达；同时使p62表达升高、 LC3表达降低，进而抑制VSMC自噬。与单纯oxLDL处理相比，联合雷帕霉素处理可逆转oxLDL诱导的VSMC铁死亡，即减少VSMC死亡数量，升高GPX4表达和GSH含量，降低MDA、 Fe²⁺含量和脂质过氧化水平；联合CCCP处理可通过激活自噬降低p62表达、升高LC3表达；并减少VSMC死亡数量，升高GPX4表达和GSH含量，降低Fe²⁺、 MDA含量和脂质过氧化水平，进而削弱oxLDL诱导的VSMC铁死亡。而且，雷帕霉素抑制mTOR后可明显逆转oxLDL引起的p62蛋白高表达和LC3蛋白低表达。结论 mTOR可能通过抑制自噬促进oxLDL诱导的VSMC铁死亡。

关键词

自噬 / 雷帕霉素靶蛋白(mTOR) / 氧化低密度脂蛋白(oxLDL) / 血管平滑肌细胞(VSMC) / 铁死亡