Adar3通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进巨噬细胞M2极化缓解病毒性心肌炎

摘要

目的 探讨RNA特异性腺苷脱氨酶3(Adar3)调控巨噬细胞极化在柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的病毒性心肌炎(VM)中的作用及机制。方法 体外培养鼠源的骨髓巨噬细胞(BMDM),以γ干扰素(IFN-γ)/脂多糖(LPS)或白细胞介素4(IL-4)分别将其诱导成M1/M2型巨噬细胞，采用实时荧光定量PCR检测各组细胞Adar1、 2、 3的表达水平。设计、合成针对Adar3基因的siRNA,瞬时转染M2型巨噬细胞，实时荧光定量PCR检测M2巨噬细胞极化相关标志基因精氨酸酶1(Arg1)、类几丁质酶3样分子3(YM1/Chi3l3)、类抵抗素分子α(RELMα/FIZZ1)的mRNA水平。RNA测序分析Adar3影响的信号通路，实时荧光定量PCR和Western blot法检测Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路表达水平。设计、合成Adar3的过表达腺相关病毒，尾静脉注射感染小鼠，三周后构建心肌炎小鼠模型，一周后检测小鼠心脏巨噬细胞表型和功能及VM的多个指标(超声心动图、体质量、病理学及血清学等),和Wnt/β-catenin信号通路蛋白水平。结果 与M0型巨噬细胞相比，M2型巨噬细胞中Adar3表达水平显著增加，转染Adar3 siRNA后，M2型巨噬细胞的Arg1、 YM1、 FIZZ1的mRNA水平下调。RNA测序显示，149个基因表达上调，349个基因表达下调。京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析，表达验证显示Adar3影响Wnt/β-catenin信号通路。体内实验显示，过表达Adar3能够减轻VM小鼠心脏功能障碍。心脏中的M1巨噬细胞比例减少，M2巨噬细胞比例增多，同时Adar3的过表达激活了Wnt/β-catenin信号通路。结论 Adar3通过激活巨噬细胞中Wnt/β-catenin信号通路促进巨噬细胞向M2型极化，以此缓解VM。

关键词

病毒性心肌炎(VM) / Adar3 / 巨噬细胞极化 / Wnt / β-catenin