一种新型负载微囊泡抗肝癌DC疫苗的制备与鉴定

摘要

目的 本研究旨在明确肝癌细胞系Hepa1-6细胞分泌的微囊泡（MP）的特性和表征，研究Hepa-1-6细胞分泌的MP（Hepa1-6-MP）对树突状细胞（DC）的刺激作用和进入DC的途径，并探索Hepa1-6-MP刺激的DC所诱导的CD8⁺ T细胞对肝癌细胞的特异性杀伤作用，试图开发一种新型的抗肝癌免疫治疗模式。方法 通过Western blot实验、透射电子显微镜（TEM）和动态光散射（DLS）实验对所提取的Hepa1-6-MP进行检测与鉴定。流式细胞术检测DC摄取MP抗原的途径与方式。ELISA检测负载Hepa1-6-MP的DC对CD8⁺ T细胞上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和γ干扰素（IFN-γ）释放水平的影响。乳酸脱氢酶（LDH）实验检测负载Hepa1-6-MP的DC所刺激的CD8⁺ T细胞对肝癌细胞的杀伤作用。结果 Hepa1-6-MP经鉴定后其形态、大小和标志物符合要求。Hepa1-6-MP可增加DC成熟标志物CD80和CD86的表达，并以网格蛋白介导的内吞途径和吞噬途径被DC摄取，然后刺激CD8⁺ T细胞释放了高水平的TNF-α和IFN-γ,并诱导CD8⁺ T细胞特异性杀伤肝癌细胞。结论 提示负载MP的DC疫苗可能是未来一种很有前景的肝癌治疗工具。

关键词

树突状细胞（DC） / 肝细胞癌（HCC） / 微囊泡（MP） / CD8⁺ T细胞 / 肿瘤免疫