小鼠LRP16基因的原核表达及兔多克隆抗体的制备与鉴定

摘要

目的 原核表达小鼠白血病相关蛋白16 (LRP16)蛋白中第59至145位氨基酸的抗原序列并制备兔抗小鼠LRP16多克隆抗体。方法 利用分子克隆法构建原核表达质粒pLS962-LRP16,转入E.coli Rosetta,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达LRP16蛋白。采取Ni-NTA亲和柱和分子筛柱进行重组蛋白的纯化。用纯化后的LRP16蛋白作为抗原，免疫新西兰兔制备抗血清，并用ELISA测定抗体滴度。抗血清经抗原亲和纯化后，用Western blot及免疫荧光法进行鉴定。结果SDS-PAGE显示LRP16融合蛋白成功表达，且以包涵体的形式表达；ELISA结果表明多克隆抗体效价高达1∶256 000; Western blot和免疫荧光法均显示该多克隆抗体能够特异性识别内源性的LRP16蛋白。结论 成功实现LRP16基因的原核表达，并制备特异性较好的兔抗小鼠LRP16多克隆抗体，为深入研究LRP16基因的功能奠定基础。

关键词

LRP16蛋白 / 原核表达 / 亲和层析 / 多克隆抗体