CD318单克隆抗体的制备及应用检测

摘要

目的 制备CD318特异性单克隆抗体并对其特异性、亲和力及在免疫学检测中的应用进行鉴定，为CD318的抗体药物研发奠定基础。方法 表达并纯化CD318蛋白，作为抗原免疫小鼠，筛选抗血清效价较高的小鼠，经过细胞融合和单克隆筛选，制备CD318的特异性单克隆抗体。对获得的单克隆抗体的特异性、亲和力及其在免疫学实验中的应用进行检测。构建靶向CD318/CD3双特异性抗体，检测其对T淋巴细胞杀伤功能的影响。结果 获得13株单克隆抗体，其中效价最好、特异性最强和用途最广泛的杂交瘤细胞株的克隆号为13-8-G2,抗体为IgG1,轻链为kappa型；轻链可变区大小为318 bp,重链可变区大小为357 bp,亲和常数约为7.68×10～9,可分别在流式细胞术和免疫荧光中用于对CD318的特异检测，用获得的CD318单克隆抗体可变区构建的靶向CD318/CD3双特异性抗体，可增强T淋巴细胞杀伤功能。结论 成功制备并获得了亲和力高、特异性好的CD318单克隆抗体，为CD318靶点的成药性抗体开发奠定了基础。

关键词

单克隆抗体 / CD318 / 制备 / 鉴定