GalNAc-T4通过细胞外信号调节激酶1/2信号通路参与缺氧复氧诱导的高糖H9c2心肌细胞自噬机制研究

摘要

目的 探讨N-乙酰氨基半乳糖转移酶4(GalNAc-T4)对高糖(HG)环境下缺氧/复氧(H/R)导致的H9c2细胞损伤模型中线粒体自噬的影响，以及其对细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号的调控机制。方法 细胞实验分为：正常对照组(Control):细胞转染pc-NC;HG组：培养基中加入50 mmol/L葡萄糖，细胞转染pc-NC;HG联合H/R组：HG处理的同时，进行低氧培养6 h,细胞转染pc-NC;过表达组(pc):细胞在进行HG联合H/R处理的同时，细胞转染pc;ERK1/2激动剂表皮生长因子(EGF)组：细胞在进行HG联合H/R以及细胞转染pc处理的同时，细胞的培养基中添加20 ng/mL的EGF。检测各组细胞的增殖活性、凋亡率、线粒体膜电位、活性氧(ROS)和铁离子以及线粒体自噬的水平，检测细胞中GalNAc-T4、 ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、线粒体外膜转位酶20(TOM20)、线粒体内膜转位酶23(TIM23)、 B淋巴细胞瘤2(Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(BAX)的表达。结果 过表达GalNAc-T4,能明显升高HG联合H/R中的H9c2细胞增殖活性、线粒体膜电位以及细胞中TOM20、 TIM23和Bcl2的表达，降低细胞的凋亡率、 ROS以及铁离子水平，抑制线粒体自噬，下调细胞中p-ERK1/2/ERK1/2和BAX的表达，EGF可部分逆转过表达GalNAc-T4对心肌细胞的保护作用，差异均具有统计学意义。结论过表达GalNAc-T4后，能明显改善高糖环境下缺氧复氧H9c2细胞的线粒体的功能障碍，抑制氧化应激以及过度的线粒体自噬，降低心肌细胞的凋亡率，这可能与其能抑制ERK1/2信号的激活有关。

关键词

线粒体自噬 / N-乙酰氨基半乳糖转移酶4(GalNAc-T4) / 缺氧/复氧(H/R) / 高糖(HG) / 心肌细胞 / 细胞外信号调节激酶1/2信号