TFEB核转位介导的GPX4溶酶体降解促进子痫前期滋养层细胞铁死亡的机制研究

摘要

目的 探讨转录因子EB（TFEB）核转位介导的谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）溶酶体降解在人胚胎滋养层细胞HTR8-S/Vneo铁死亡中的作用。方法 将HTR8-S/Vneo细胞分为正常组、缺氧组、缺氧联合si-NC组（细胞转染si-NC）、缺氧联合si-TFEB组（细胞转染si-TFEB）、缺氧和si-TFEB联合RSL3组（细胞转染si-TFEB并用铁死亡诱导剂RSL3处理）以及缺氧和si-TFEB联合PP242组（细胞转染si-TFEB并用溶酶体激活剂PP242处理）。采用CCK-8试剂盒、划痕实验、 Transwell^TM实验分别检测细胞活力、侵袭数量和迁移率。使用FerroOrange铁离子探针检测细胞中Fe²⁺的含量。利用DCFH-DA活性氧（ROS）荧光探针检测ROS水平。ELISA检测乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性。Western blot法检测TFEB、磷酸化TFEB（p-TFEB）、 GPX4蛋白表达以及TFEB核转位情况。利用溶酶体绿色荧光探针检测细胞溶酶体荧光强度。结果 与正常组相比，缺氧组细胞活力、侵袭数量和迁移率显著减少，细胞中Fe²⁺水平、 ROS荧光强度、 LDH和MDA水平显著增加，SOD活性和GSH水平显著减低，TFEB、 p-TFEB蛋白表达显著增加，GPX4蛋白表达显著减少，TFEB发生核转位，溶酶体荧光强度增加。与缺氧联合si-NC组相比，缺氧联合si-TFEB组细胞活力、侵袭数量和迁移率显著增加，铁死亡水平降低，TFEB核转位被抑制，溶酶体荧光强度降低。与缺氧联合si-TFEB组相比，缺氧和si-TFEB联合RSL3组HTR8-S/Vneo细胞铁死亡各项指标被逆转。与缺氧联合si-TFEB组相比，缺氧和si-TFEB联合PP242组细胞铁死亡水平升高。结论 抑制TFEB核转位进而降低人胚胎滋养层细胞HTR8-S/Vneo铁死亡，其机制可能与抑制GPX4的溶酶体降解有关。

关键词

转录因子EB(TFEB) / 谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4) / 子痫 / 铁死亡